质粒部职责

1. 什么叫质粒介导和染色体介导

首先讲介来导，介——媒介，导——转自导。理解否？

质粒介导，就是由质粒来作为媒介转导某种物质；染色体介导，同理。

例如接合这个概念就可以帮你理解介导：接合是指细菌通过质粒介导和性菌毛连接沟通的细胞间接触,将遗传物质(质粒或染色体)从供体菌转入受体菌。

2. 根据目的基因构建重组质粒的步骤

（1）用限制酶将质粒切割开形成黏性末端，用DNA连接酶将目的基因与质粒连接起来． （2）质粒的实质是环状DNA，基本组成单位是脱氧核苷酸；由图中限制酶切割位置可知，目的基因插入的位置是氨苄青霉素抗性基因中． （3）步骤③是基因工程第三步：将目的基因导入大肠杆菌（受体细胞）．为了促进该过程，用Ca 2+ 处理大肠杆菌，使之成为感受态细胞． （4）培养基C是选择培养基，培养基中有四环素，专一筛选含四环素抗性基因的大肠杆菌，能在C中生长的大肠杆菌有两种，分别是含有抗四环素基因、同时抗四环素基因和含氨苄青霉素基因的大肠杆菌． （5）D培养基中大肠杆菌能抵抗四环素和含氨苄青霉素，而E中只抗一种四环素，所以在E中对应区域（D中没有菌落的部位），该处为转基因大肠杆菌，结果如图： 故答案为： （1）限制酶 DNA连接酶 （2）脱氧核苷酸 氨苄青霉素抗性 （3）将重组质粒（目的基因）导入大肠杆 菌（受体细胞） Ca 2+ （4）2 （5）E 如下图所示（两点全圈出给分）． （1）限制酶 DNA连接酶 （2）氨苄青霉素抗性 （3）将重组质粒导入大肠杆菌（受体细胞） Ca 2+ （4）含四环素抗性基因的大肠杆菌 2 （5）E

3. Ti质粒的转化有哪些机理

根癌农杆菌之所以会感染植物根部是因为植物根部损伤部位会分泌出酚类物质专——乙酰丁香酮属和羟基乙酰丁香酮，这些酚类物质能诱导Ti质粒上的emphasis：role=italicviremphasis基因以及根癌农杆菌染色体上的一个操纵子表达。emphasis：role=italicviremphasis基因产物将Ti质粒上的T-DNA单链切下，而根癌农杆菌染色体上的操纵子表达产物则与单链T-DNA结合形成复合物，转化植物根部细胞。

整个过程大致可分为以下几个步骤：①根癌农杆菌对植物细胞的识别和附着；

②根癌农杆菌对植物信号物质的感受；

③根癌农杆菌Ti质粒上的emphasis：role=italicviremphasis基因以及染色体上操纵子的活化；

④T-DNA复合体的产生；

⑤T-DNA复合体的转运；

⑥T-DNA整合到植物基因组中。

4. 什么是F质粒

质粒（plasmid）是细菌、酵母菌和放线菌等生物中染色体（或拟核）以外的DNA分子，存在于细胞质中，具有自主复制能力，使其在子代细胞中也能保持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息，是闭合环状的双链DNA分子。

质粒不是细菌生长繁殖所必需的物质，可自行丢失或人工处理而消除，如高温、紫外线等。质粒携带的遗传信息能赋予宿主菌某些生物学形状，有利于细菌在特定的环境条件下生存。

质粒(plasmid) 广泛存在于生物界，从细菌、放线菌、丝状真菌、大型真菌、酵母到植物，甚至人类机体中都含有。从分子组成看，有DNA 质粒，也有RNA 质粒; 从分子构型看，有线型质粒、也有环状质粒: 其表型也多种多样。细菌质粒是基因工程中最常用的载体。

(4)质粒部职责扩展阅读：

质粒具有自主复制能力，使其在子代细胞中也能保持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息。细菌质粒是DNA重组技术中常用的载体。载体是指把一个有用的外源基因通过基因工程手段，送进受体细胞中去进行增殖和表达的工具。

将某种目标基因片段重组到质粒中，构成重组基因或重组体。然后将这种重组体经微生物学的转化技术，转入受体细胞(如大肠杆菌)中，使重组体中的目标基因在受体菌中得以繁殖或表达，从而改变寄主细胞原有的性状或产生新的物质。

质体与染色体最主要的区分是，质体不是细胞生存所必需，染色体则是细胞生存必需的。大部分的质体都是环状分子，但是也有少数属于线状分子，它存在于许多细菌以及酵母菌等生物中，乃至于植物的线粒体等胞器中。

5. 质粒,芽孢的概念及特点

质粒（Plasmid）是附加到细胞中的非细胞的染色体或核区DNA原有的能够自主复制的较小的DNA分子（即细胞附殖粒、又胞附殖粒）。大部分的质粒虽然都是环状构形，然而目前也发现有少数的质粒属于线性构形，它存在于许多细菌以及酵母菌等生物中，乃至于植物的线粒体等胞器中。
http://ke..com/view/20005.htm

芽孢的定义 芽孢——特殊的休眠构造 英文名称：spore ，endospore 有些细菌（多为杆菌）在一定条件下，细胞质高度浓缩脱水所形成的一种抗逆性很强的球形或椭圆形的休眠体。对多数细菌来说1个菌体细胞只形成1个芽孢，但有些菌体会生成两个芽孢，如坚强芽孢杆菌，有的在细胞一端生成，有的在细胞中部生成。由于芽孢是在细胞内形成的，所以也常称之为内生孢子，亦称芽孢。每一细胞仅形成一个芽孢，所以其没有繁殖功能。
http://ke..com/view/44590.htm

6. 质粒是如何进行自我复制的

质粒,就是一个环状的双链DNA分子.
质粒的复制,也是半保留复制.复制时,双链局部解开,启动子链的合成,子代DNA链合成完毕后,分别与亲代DNA链组成两个环状的DNA分子.
质粒的复制呈现θ型.

7. 质粒图谱怎么看

1.第一步，看箭头：

大多数质粒都会有箭头，箭头有两种解释。一种是转录方向，转录方向主要是由启动子开始的一个大箭头，是启动子启动序列的顺序。另一种是复制起始位点的方向，复制起始位点就是该质粒在大肠杆菌等细菌或真菌中DNA复制的一个方向。

还需要提到的是F1启动子（图上的f1 ori）代表的是噬菌体的复制起始方向，只能复制出单链的DNA哦，但是可以用来测序。看懂转录的方向，这样就方便设计插入片段的位置和方向性。

2.第二步，看上面的标签。

报告基因：通常会有一两个蛋白，被用作报告基因，比如常见的copGFP（绿色荧光蛋白），Puro（嘌呤霉素），Lacz（乳糖操纵子）等等。和抗性基因不同，这样的报告基因，并不是为了在大肠杆菌扩增质粒的过程中起作用的。

而是在质粒转入表达体系后起到作用的，基本上就是为了显示过表达或是敲减的基因是否正常运作。有的报告基因会融合在蛋白中表达，有的会另外用一个独立的启动子进行表达（比如shRNA的质粒中）。

3.第三步，看多克隆位点：

MCS（Multiple Cloning Site，也就是多克隆位点），一般图中会把多克隆位点上的酶切位点都标记出来。上面的酶切位点顺序，一般都是按照5`-3`的顺序排列下来的，需要注意的是这样几点。

第一点是要注意，酶切位点边标注了*的一般是指并不仅仅存在一个位点，也就不能用来作为构建质粒的酶切位点。

第二点需要注意的是，有的酶切位点，在序列中只有一个，但它上面也会标注一个*或者（dam），这说明可能这个酶切位点会有CpG岛的甲基化修饰[常见的是XbaI，TCTAG(6m)A中的TC无法切开]，一般也是不能用的。但是非要用这个酶切位点的话，就需要用非甲基化的感受态细胞，如JM109或者JM110。

4.第四步，看多克隆位点的序列：

末端如果有差异的话，可以把基因的ATG（甲硫氨酸）的5`末端替换1-2个碱基（变成GTG或者GCG这样），从第二个氨基酸序列开始完全一致即可。而配合扩增和酶切的话，插入片段是允许有3`末端的冗余。

为了可以应付3`末端的冗余碱基，在多克隆位点序列后，会有译码的终止TAA密码，即使插入的片段使得3`末端产生了移码突变，照样能使表达的蛋白正常终止掉（在酵母双杂的AD质粒中，由于插入的是随机cDNA，所以AD的载体上会常见这样的结构）。

(7)质粒部职责扩展阅读

分类

1.根据质粒能否通过细菌的接合作用，可分为接合性质粒和非接合性质粒。

接合性质粒带有与接合传递有关的基因。非接合质粒在一定条件下通过与其共存的接合质粒的诱动或转导而传递。

2.根据质粒在细菌内的复制类型可分为两类：严紧控制型和松弛控制型。

严紧控制复制型质粒的复制酶系与染色体DNA复制共用，只能在细胞周期的一定阶段进行复制，当细胞染色体停止复制时，质粒也就不再复制。

松弛控制复制型的质粒的复制酶系不受染色体DNA复制酶系的影响，在整个细胞生长周期中随时都可以复制，在染色体复制已经停止时质粒仍能继续复制。

3.根据质粒的不相容性，可分为不相容性和相容性。

不相容性指结构相似、密切相关的质粒不能稳定地共存于同一宿主细菌内的现象，反之为相容性。常用于流行病学的调查。

8. 质粒与病毒的区别

质粒
质粒是染色体外能够进行自主复制的遗传单位，包括真核生物的细胞器和细菌细胞中染色体以外的脱氧核糖核酸(DNA)分子。现在习惯上用来专指细菌、酵母菌和放线菌等生物中染色体以外的DNA分子。在基因工程中质粒常被用做基因的载体。

目前，已发现有质粒的细菌有几百种，已知的绝大多数的细菌质粒都是闭合环状DNA分子(简称cccDNA)。细菌质粒的相对分子质量一般较小，约为细菌染色体的0.5%～3%。根据相对分子质量的大小，大致上可以把质粒分成大小两类：较大一类的相对分子质量是40×106以上，较小一类的相对分子质量是10×106以下(少数质粒的相对分子质量介于两者之间)。每个细胞中的质粒数主要决定于质粒本身的复制特性。按照复制性质，可以把质粒分为两类：一类是严紧型质粒，当细胞染色体复制一次时，质粒也复制一次，每个细胞内只有1～2个质粒；另一类是松弛型质粒，当染色体复制停止后仍然能继续复制，每一个细胞内一般有20个左右质粒。一般分子量较大的质粒属严紧型。分子量较小的质粒属松弛型。质粒的复制有时和它们的宿主细胞有关，某些质粒在大肠杆菌内的复制属严紧型，而在变形杆菌内则属松弛型。

病毒：是一类没有细胞结构但有遗传复制等生命特征，主要由核酸和蛋白质组成的大分子生物。病毒没有细胞结构
质粒不是病毒，只是细胞中除了染色体之外的DNA,使细胞的组成成分。而病毒可能是DNA,RNA,或蛋白质，使细胞的入侵者

9. 质粒是如何进行自我复制的

质粒，就是一个环状的双链DNA分子。

质粒的复制，也是半保留复制。复制时，双链局部解开，启动子链的合成，子代DNA链合成完毕后，分别与亲代DNA链组成两个环状的DNA分子。

质粒的复制呈现θ型。