封口膜被污染

❶ 植物组织培养中哪些因素可导致污染的发生

污染原因1.1
外植体
①年龄、种类和大小。成年植株带菌多；生理年龄老的材料带菌多；杂菌和内生菌多的外植体、有病虫害的植株，均易污染；室外生长的材料带菌多；表面有泥土的材料、地下器官均带菌多；表面积大的材料比表面积小的材料带菌多[1-2]。
②取材时期和部位。雨季菌类繁殖旺盛，此时材料带菌多；阳光最强时紫外线较强，杀菌效果好，此时材料带菌较少；选取了不清洁、生长不旺盛部位的材料带菌多[1]。
③灭菌效果。外植体灭菌是组织培养的关键，灭菌效果直接决定了组织培养的成败，灭菌方法和灭菌剂处理不当导致灭菌效果差，使外植体带菌。1.2
组织培养过程中各技术环节操作不规范①培养基。使用长菌的母液配制培养基；培养
基pH值高、添加的有机成分均可导致细菌污染；培养基分装好后没有及时封口或封口后没有立即灭菌；培养容器口没有封严导致灭菌后细菌和真菌孢子再次进入培养容器使培养基污染；封口用的塑料盖、封口膜长时间在日光灯照射下易老化、破裂，导致密封性差，不慎使用后可能导致培养基污染；橡皮筋长时间在日光灯照射下也易松动、断裂，杂菌可能趁机进入培养容器；灭菌方法不当导致培养基污染；灭菌时间过短导致培养基灭菌不彻底；灭菌时间达到后立即打开灭菌锅，导致容器内压力差过大，使外部杂菌有可能被倒吸入容器中[1]；过滤较多溶液后，滤膜过滤效果较差，使过滤后的溶液有菌，加入培养基后造成污染。
②培养容器和接种器具。培养容器不清洁；培养容器被污染后灭菌不彻底，再次使用时导致污染；高压灭菌锅或烘箱内培养容器、接种器具装得过满，影响灭菌效果；培养容器、接种器具灭菌时间过短导致灭菌不彻底；灭菌结束后立即打开高压灭菌锅或烘箱，强烈的冷热对流会导致冷空气被吸入包扎层内而重新造成污染带菌[1]。
③接种人员。过长指甲；双手未清洗干净；衣服和头发有很多灰尘，接种时不换拖鞋、接种服、帽子和口罩；不慎将已污染的培养材料拿入超净工作台，转接后再次污染；培养容器中接种的培养物过多；超净工作台上物品摆放过多、过高使气流被挡住，导致灭菌效果差；接种时说话或咳嗽会呼出大量细菌；操作时手超出工作台面；手接触培养容器边缘，放在器皿、接种器械上方致使微生物落入培养容器中；打开培养容器的塞子、盖或封口膜时空气进入带来灰尘；接种过程中器械被手或带菌材料污染后未经消毒，再次使用后又污染了材料；没有在超净工作台下风方向操作而使菌类随风飘落到容器中[3]；中途离开超净工作台后马上又继续接种，将培养基、器械等物品拿入超净工作台继续接种而带入灰尘，顺风飘入器皿。服装、帽子、口罩、拖鞋长期穿戴后较脏，表面有大量灰尘，未经清洗反复穿戴后造成污染。
④接种室和培养室。人员的进出导致接种室和培养室空气中存在大量细菌和真菌，尤其是接种过程中非工作人员的进出；接种室设计不合理，造成室内灰尘、细菌过多；超净工作台置于灰尘太多的地方，过滤装置使用过久、保养不当造成失效；组培室、接种室门窗封闭不严，苍蝇等趁机飞入，利于杂菌传播；培养室面积大易污染，室内温度高、空气湿度大，菌类繁殖旺盛也会加重污染

❷ 封口膜膜、纸分离了还能不能防菌污染

封口膜只是辅助工具，并不直接接触无菌样品，一般用于封存培养皿、EP管、血清瓶等等，都不会接触到无菌的样品，所以略带有杂菌也没有关系。
你如果实在怕杂菌，可以用75%酒精喷喷，放超净台中晾干。

❸ 连续多次制作的MS培养基灭菌三四天后就会发现被污染了，请求哪位专家帮忙看看是什么原因，谢谢。

你们这做实验的连封口膜都不用，不会污染才怪呢。本来培养基这东西放置不用的话就用保鲜膜包好放到无菌室里，就这有时候还有污染的。你们这什么措施都没有啊。

❹ 封口膜,杯边边太多了怎么办

封口膜杯边边太多的话，这个边太多，可以进行裁剪一部分，或者的话，选择合适的封口膜

❺ 培养基忘了用封口膜封上怎么办

赶紧封上，培养几天，看看长没长菌。

❻ 为什么在PDA上接种真菌时在培养皿边缘总是污染不明细菌

如果只是抄在边缘的话袭，我怀疑是你的平皿盖的问题。
应该是铺完PDA后，冷却的时候冷凝水凝集在平皿盖上，收取的时候，冷却水沿着平皿边缘跑到培养基边缘。
或者就是平皿盖不严实，加上有冷凝水，那也容易带细菌进去。
其他可能性也有，做实验嘛，总有意想不到的。就是操作中，空平皿灭菌的时候需要包严实，有条件的话尽量用一次性平皿，无菌操作有超净台，就用超净台，学校里的学生实验往往都只是一个酒精灯。培养基冷却完，盖好盖子，最好用封口膜封口，4℃保存。无菌接种的时候手及手套尽量消毒。我能想到就这些，祝你实验顺利。

❼ 培养灭完菌发现报的封口膜被冲开了，能被污染吗

应该是琼脂在高温下被酸水解了，可以试试单用琼脂加酸加热就知道了。其实盐酸的话本身不太易染菌，灭完培养基再加盐酸估计问题不大。如果是严要求比较高就知道分开灭菌然后再混合了。

❽ parafilm m-996封口膜透气吗

主要是避免污染的。不然孢子可能飘进去~~~都要缠的。 我是做植物的，大专肠杆菌是兼性厌氧，农属杆菌是好氧的，以及组培的我们都是缠了的。封口膜是由透气性的~~~不过我不知道你用的是什么膜~~~ ps：我们用得parafilm膜~~~

❾ 细胞培养液没用封口膜封口会污染吗

有很大的可能会污染，所以在做细胞培养的时候最好使用封口膜。

封口膜主要特点在于密封性能效果好，防止产品内容物挥发以及污染。