pcr污染

『壹』 PCR实验室污染了怎么处理

出现污染后，我们首先考虑可能是试剂的污染，更换新批号的HBV试剂重新检测后，结果仍为全部标本阳性。
将HBV标本拿到其他正规的PCR实验室检测，结果标本中阴、阳性结果都有，阴性对照是阴性，阳性对照是阳性，说明标本没有被污染将两种批号的HBV试剂拿到其他正规的PCR实验室检测，也显示试剂没有问题。
我实验室用消毒液擦拭工作台面后，打开所有的紫外灯照射一天，将所使用微量进样器、离心管、枪头、手套、记号笔、记录本等都更换掉，再将HBV标本进行检测，结果全部标本仍然为阳性。
用消毒液擦拭工作台面后，打开所有的紫外灯照射一天，将HBV标本重新检测，同时设置了两个阴性对照(A和B)，A 阴性对照为将试剂的反应管从试剂盒中拿，打开反应管的盖子，在空气中暴露10 min，盖上盖子，上机检测；B阴性对照为将试剂的反应管从试剂盒中拿，不开盖子，直接上机检测。结果是全部标本和A阴性对照为阳性，而B阴性对照为阴性。
至此，虽然还查找不到污染源是什么，但有一点可以肯定，PCR实验室污染是气溶胶扩散而引起的后来经过调查，发现污染是由于本室工一位工作人员在打扫实验室卫生时，用扩增区的扫笤和拖把打扫了标本制备区的卫生引起。

在确定了污染的原因后，我们就开始着手排除污染，每天都打开整个PCR 实验室的门窗和排气扇，让整个实验室通风，用消毒液擦拭整个PCR实验室，打开所有的紫外灯照射。
每隔3 d按3．5步骤检测一次，一直这样处理了一个月，A阴性对照才转为阴性。连续检测三次A和B阴性对照，每次结果都均为阴性，才确定PCR实验室恢复正常。

通常我们对PCR实验室污染的预防是采取隔离不同操作区、分装试剂、改进实验操作等规则，对污染的处理是用稀盐酸擦拭或浸泡；紫外线照射法等 ]。而对于实验室的通风方面没有给予足够的重视，为了防止实验区间之间的相互污染，各个实验区间都是尽可能的密闭，从而使得实验室出现PCR产物残留污染的几率增大。从本次PCR实验室污染排除的过程来看．我觉得污染得以排除的一个关键是通风。适当的给予实验室通风，可起到空气稀释的作用，有利于PCR产物残留量的减少，加快实验室污染的排除。

『贰』 PCR实验过程中易发生污染的原因有哪些

产生污染主要有以下4个原因：

①是PCR扩增产物的污染。这也是最常见的污染原因。PCR产物经反复多次的扩增，其复制量远远超过PCR的检测极限，所以即使是极微量的污染也足以造成实验结果假阳性。

②试剂的污染。在试剂的配制过程中，接触了污染的容器、移液器、枪头、溶液等物导致试剂被污染。

③待测样品被污染。放置样品的容器被污染或由于容器密封不严导致样品与外界接触被污染;其次在核酸提取过程中使用了被污染的移液器或枪头导致样品被污染;另外，某些样品中含有病毒，若弥散到空气中则有可能形成交叉污染。

④气溶胶污染。若气溶胶中包含病毒等污染物扩散至空气中极有可能造成PCR产物污染。气溶胶是由空气与液体表面摩擦而产生的，开盖、晃动反应管及污染加样器的反复吸样都可形成气溶胶从而导致交叉污染。据计算一个气溶胶颗粒可含48 000 拷贝，因此，应尤其重视由气溶胶导致污染的问题。PCR 实验室只要出现了污染，之前的结果报告就变为无效而且也无法进行其他的实验操作。必须找出并彻底清除污染源，才能得到准确有效的实验结果。

『叁』 PCR的主要污染物

DNA分子气溶胶，对PCR影响最大，直接导致非特异性的扩增产物，需要定期对实验室做紫外线照射。另外空气中粉尘也会影响，但是现在都是使用超净工作台，这个问题可以避免。

『肆』 怎么防止PCR实验室污染

PCR实验室污染

标本间交叉污染：标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染；标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染。

PCR试剂的污染：主要是由于在PCR试剂配制过程中，由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。

PCR扩增产物污染：这是PCR反应中最主要最常见的污染问题。因为PCR产物拷贝量大，远远高于PCR检测数个拷贝的极限，所以极微量的PCR产物污染，就可造成假阳就可形成假阳性。

还有一种容易忽视，最可能造成PCR产物污染的形式是气溶胶污染；在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶，在操作时比较剧烈地摇动反应管，开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染。

实验室中克隆质粒的污染：在分子生物学实验室及某些用克隆质粒做阳性对照的检验室，这个问题也比较常见，因为克隆质粒在单位容积内含量相当高，另外在纯化过程中需用较多的用具及试剂，而且在活细胞内的质粒，由于活细胞的生长繁殖的简便性及具有很强的生命力，其污染可能性也很大。

污染监测

一个好的实验室，要时刻注意污染的监测，考虑有无污染是什么原因造成的污染，以便采取措施，防止和消除污染。

对照试验

1、阳性对照：在建立PCR反应实验室及一般的检验单位都应设有PCR阳性对照，它是PCR 反应是否成功、产物条带位置及大小是否合乎理论要求的一个重要的参考标志。

2、阴性对照：每次PCR实验务必做阴性对照。它包括①标本对照：被检的标本是血清就用鉴定后的正常血清作对照；被检的标本是组织细胞就用相应的组织细胞作对照。②试剂对照：在PCR试剂中不加模板DNA或RNA，进行PCR扩增，以监测试剂是否污染。

3、重复性试验

4、选择不同区域的引物进行PCR扩增

防止污染的方法

进行PCR操作时，操作人员应该严格遵守一些操作规程，最大程度地降低可能出现的PCR污染或杜绝污染的出现。

划分操作区：目前，普通PCR尚不能做到单人单管，实现完全闭管操作，但无论是否能够达到单人单管，均要求实验操作在三个不同的区域内进行，PCR的前处理和后处理要在不同的隔离区内进行：
1. 试剂准备区。
2．标本制备区。
3. PCR扩增区及分析区。

切记：任何一间的产物及器材不要拿到其他两个工作区。

分装试剂：PCR扩增所需要的试剂均应在生物安全柜、装有紫外灯的超净工作台或负压工作台配制和分装。所有的加样器和吸头需固定放于其中，不能用来吸取扩增后的DNA和其他来源的DNA：
1．PCR用水应为高压的双蒸水；
2．引物和dNTP用高压的双蒸水在无PCR扩增产物区配制；
3．引物和dNTP应分装储存，分装时应标明时间，以备发生污染时查找原因。

实验操作注意事项

尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因，样品间的交叉污染也是原因之一。因此，不仅要在进行扩增反应是谨慎认真，在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意：
1. 戴一次性手套，若不小心溅上反应液，立即更换手套；
2. 使用一次性吸头，严禁与PCR产物分析室的吸头混用，吸头不要长时间暴露于空气中，避免气溶胶的污染；
3. 避免反应液飞溅，打开反应管时为避免此种情况，开盖前稍离心收集液体于管底。若不小心溅到手套或桌面上，应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面；
4. 操作多份样品时，制备反应混合液，先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好，然后分装，这样即可以减少操作，避免污染，又可以增加反应的精确度；
5. 最后加入反应模板，加入后盖紧反应管；
6. 操作时设立阴阳性对照和空白对照，即可验证PCR反应的可靠性，又可以协助判断扩增系统的可信性；
7. 尽可能用可替换或可高压处理的加样器，由于加样器最容易受产物气溶胶或标本DNA的污染，最好使用可替换或高压处理的加样器。如没有这种特殊的加样器，至少PCR操作过程中加样器应该专用，不能交叉使用，尤其是PCR产物分析所用加样器不能拿到其它两个区；
8. 重复实验，验证结果，慎下结论

『伍』 PCR污染的原因是什么

污染原因：
1）标本间交叉污染：标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染；标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染；有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染。
2） PCR试剂的污染：主要是由于在PCR试剂配制过程中，由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。
3.）PCR扩增产物污染：这是PCR反应中最主要最常见的污染问题。因为PCR产物拷贝量大(一般为1013 拷贝/ml)，远远高于PCR 检测数个拷贝的极限，所以极微量的PCR产物污染，就可造成假阳就可形成假阳性。
4）容易忽视，最可能造成PCR产物污染的形式是气溶胶污染；在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶，在操作时比较剧烈地摇动反应管，开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染。据计算一个气溶胶颗粒可含48000 拷贝，因而由其造成的污染是一个值得特别重视的问题。

『陆』 PCR 产物污染是怎么回事

这个问题问得太含糊了 产物污染有很多 具体是P出杂带、引物二聚体、蛋白污染还是别的什么的？需要针对性提问

『柒』 pcr实验室出现污染，怎么清除

实验室不是都有大型的通风设备，只能开启通风设备，人员尽量不要进入。几天后应该会缓解吧。暂时没想到其他方法。

『捌』 如何预防PCR实验室污染

进行分子检测操作时，操作人员应该严格遵守一些操作规程，最大程度地降低可能出现的PCR污染或杜绝污染的出现。
1）实验分区：实验操作最好在三个不同的区域内进行，PCR的前处理和后处理要在不同的隔离区内进行：
各工作区要有一定的隔离，操作器材专用，要有一定的方向性。如：试剂准备
→标准制备→PCR扩增区及分析区。
切记：任何一间的产物及器材不要拿到其他两个工作区。
2）分装试剂：可把试剂反应液先分装成20ul 的小管（PCR管，一次分装不宜过多，以一周用完为宜），严格-20℃保存；用时把分装好的小管拿出加入模板即可。PCR扩增所需要的试剂均应在生物安全柜、装有紫外灯的超净工作台或负压工作台配制和分装。所有的加样器和吸头需固定放于其中，不能用来吸取扩增后的DNA和其他来源的DNA。
3）严格取样。取样需要按照取样规程来，做到专物专用（如取样袋、剪刀等），禁止一物用在多个样品上。
4）清洁实验环境，减少阳性残留。每次使用完的台面、超净台或者生物安全柜都需及时清理，酒精擦拭、紫外照射。有条件的话，实验区要保持通风换气。
5. 扩增产物处理。分子检测的环境污染大部分都是扩增产物的气溶胶污染；对于扩增产物要做到：1）尽量不开盖；2）及时处理，丢弃时需放入密封袋中密封好再处理。
6. 实验工具的定期清洁。实验服、移液枪等都需定期清洗。
7. 勤换手套。样品前处理完后，需换新的手套进行配液操作。
8. 严格按照说明书中的注意事项进行操作。
9. 注意通风换气。每次实验都要保证排气扇或风扇的运行。

『玖』 PCR实验室出现了污染该怎么处理

换地方做实验，原房间通风照紫外