细胞真菌污染

㈠ 细胞或真菌污染的液体进入体内多久会引起严

细胞培养物污染往往是细胞培养实验室最常遇到的问题,有时会带来十分严重的后果.细胞培养污染物主要分为两类,一类是化学污染物,例如：培养基、血清和水中的杂质、内毒素、增塑剂和去污剂,另一类是生物污染物,例如：细菌、霉菌、酵母、病毒、支原体以及其他细胞系的交叉污染.尽管无法彻底消除污染,但是可以通过充分了解污染源以及采用良好的无菌技术,降低污染发生的频率和严重程度.细菌是一大类广泛存在的单细胞微生物.细菌直径一般为几个微米,外形多样,例如：球状、杆状和螺旋状.细菌由于分布广泛、生长迅速以及体积大小的特点,与酵母和霉菌一起构成了细胞培养中最常遇到的生污染物.培养物被细菌污染后,几天内即可通过简单的肉眼观察发现；被感染的培养物通常呈云雾状(即：浑浊状),有时表面会覆盖一层薄膜.另外,经常还会发现培养基的pH值突然降低.在低倍显微镜下可见,细菌为细胞之间移动的微小颗粒,在高倍显微镜下观察可以分辨出各个细菌的形状.酵母是真菌界的一种单细胞真核微生物,大小从数微米(多见)到40微米(罕见)不等.与细菌污染类似,培养物被酵母污染后也会变得浑浊,特别是进入污染后期时.培养物被酵母污染后pH值变化极小,污染严重时pH值才会升高.在显微镜下,酵母呈单个卵圆形或球形颗粒,有些会芽生出较小的颗粒.霉菌是真菌界的一种真核微生物,以被称为菌丝的多细胞丝状体形式生长.这些多细胞丝状体构成的交联网络含有遗传性相同的细胞核,被称为集落或者菌丝体.与酵母污染类似,霉菌污染初期培养物pH值会维持稳定,污染加重后pH值会迅速升高,导致培养物浑浊.在显微镜下,菌丝体通常呈细束状纤维,有时呈较为密集的孢子团块.许多种霉菌的孢子在休眠期均可耐受极端严峻、不利的环境,当其遇到合适的生长条件时才会被活化.病毒是一种微观感染性物质,利用宿主细胞结构进行复制.病毒体积极小,因而要检测培养物中有无病毒以及将其从细胞培养实验室所用试剂中去除都十分困难.由于大多数病毒对宿主有非常严格的要求,因此一般不会对与其宿主物种不同的细胞培养物造成不良影响.但是,使用病毒感染的细胞培养物时却会对实验室工作人员造成严重的健康威胁,特别是当实验室培养的是人或灵长类动物细胞时.通过电子显微镜检查、一组抗体的免疫染色、ELISA实验或者采用适当病毒引物的PCR技术可以检测出细胞培养物的病毒污染.支原体是一种没有细胞壁的简单细菌,被认为是能够自我复制的最小的生物.由于体积极小(般小于1微米),支原体的检测十分困难,除非其达到极高的密度,导致细胞培养物变质,在此之前往往没有明显的感染征象.有些生长缓慢的支原体可能会在培养物中持续存在,而不会导致细胞死亡,但是这些支原体会改变培养体系中宿主细胞的行为和代谢.慢性支原体感染的可能表现包括：细胞增殖速度降低、饱和密度下降以及悬浮培养物凝集；但是,唯一切实有效的检测支原体污染的方法就是采用荧光染色(例如：Hoechst33258)、ELISA、PCR、免疫染色、放射自显影或者微生物学测定技术定期检测培养物.

㈡ 细胞培养污染，如图，这到底是什么污染真菌细菌

细菌污染会出现培养基混浊，细胞脱壁。真菌污染会出现悬浮物或菌丝体，培养基不混浊。看样子象是真菌污染。

㈢ 细胞培养时为了防真菌污染需要加什么样的抗生素

通常用两抄性霉素B (Fungizone)

两性袭霉素B是一种对真菌有抗菌活性的抗生素。将其作为一种抗真菌、抗酵母菌以及抗霉菌制剂使用。它通过与固醇结合，干扰敏感真菌的细胞膜渗透性。通常的有效浓度是2.5μg/ml，在30μg/ml时有细胞毒性。

此外也可以选择在培养基里加3u/ml的制霉菌素或放线菌素D。

真菌污染是个很麻烦的事，很难彻底消除，建议重新复苏细胞或从新分离或购买细胞。

在细胞培养中未见有用灰黄霉素的，用法与用量不详。

㈣ 长满的细胞怀疑有真菌污染，可以提蛋白做WESTERN吗

Cells are full of suspected fungal contamination and can lift proteins

㈤ 细胞培养，常见的真菌污染源有哪些

细胞培养，常见的真菌污染源有哪些
培养基变浑浊的原因可能有如下几点：
1、细胞存在污染，污染早期可以见到细胞生长；
2、不排除传代时细胞密度过大，或者操作不当导致多数细胞不贴壁，大量细胞漂浮。
3、细胞破碎。

细胞培养中常见的生物污染类型有7种,分别是细菌污染、支原体污染、原虫污染、黑胶虫污染、真菌污染、病毒污染以及非细胞污染.他们在细胞培养中污染的特点如下：
1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状,根据感染细菌的不同,可有不同的外形,培养液一般会浑浊变黄,对细胞生长影响明显.
2、支原体：黑色的,好象多为多形,培养液一般培养液一般会浑浊,原体感染,国内血清很多都没有做支原体阴性检测,而支原体是牛血清中最常见的微生物之一.而且它不能用过滤的办法除去.支原体感染细胞以后,细胞病变不很明显,只是慢慢死去.
3、黑胶虫：可以穿透滤膜,也可以通过空气传播,低倍下为黑色点状,高倍下可看见黑色的小虫游来游去,培养液也是不浑的,一般不会太影响,细胞还是可以用的.常常是细胞生长状态良好,且观测到的运动物无明显增多,且培养液颜色、透明度无明显变化,可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象.对细胞生长状态不会有明显影响,在细胞增殖旺盛之后会自然消失,除更换血清外无须特殊处理.
4、真菌：一般培养液清亮,不变色,镜下有丝状物,有些真菌开始很像死细胞碎片,只是它很多很多的小块很清楚,象珊瑚状,不象细胞碎片分不清,慢慢的会长出很细的黑色丝状物.真菌生长的比较慢,不象细菌那么容易被发现,但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了,也很难救活了.
5、原虫：培养液可轻微浑浊,显微镜下那些细小的点状物数量非常多,轻微活动,细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢,而且细胞状态不好,边缘不清楚,细胞不透亮.他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养.这种共生是非常普遍的,但他们的数量小,细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长,只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长,最终形成恶性循环.
6.病毒：组织细胞培养过程中,如果没有除去潜在的病毒,就会产生病毒污染.目前,从原代猴肾细胞的培养中已发现不少于20种血清性病毒.尽管病毒污染的细胞不影响原代培养,但生产疫苗是不安全的.因此,潜在病毒是细胞大量生产和疫苗、干扰素等生物制品制作中的难题 。
7、非同种细胞污染 ：即是细胞交叉污染,由于细胞培养操作时各细胞株所需的器材和溶液没有严格分开,往往会使一种细胞被另一种细胞污染.目前,世界上已有几十种细胞都被HeLa细胞所污染,致使许多实验宣告无效.非细胞培养物所造成的化学成分的污染也偶有发生,大多是由于细胞培养所需物品清洗消毒不彻底而带入一些有毒化学物质所致.

㈥ 细胞真菌污染了，怎么办

1、细胞存在污染，污染早期可以见到细胞生长；
2、不排除传代时细胞密度过大，或者操作不当导致多数细胞不贴壁，大量细胞漂浮。
3、细胞破碎。

细胞培养中常见的生物污染类型有7种,分别是细菌污染、支原体污染、原虫污染、黑胶虫污染、真菌污染、病毒污染以及非细胞污染.他们在细胞培养中污染的特点如下：
1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状,根据感染细菌的不同,可有不同的外形,培养液一般会浑浊变黄,对细胞生长影响明显.
2、支原体：黑色的,好象多为多形,培养液一般培养液一般会浑浊,原体感染,国内血清很多都没有做支原体阴性检测,而支原体是牛血清中最常见的微生物之一.而且它不能用过滤的办法除去.支原体感染细胞以后,细胞病变不很明显,只是慢慢死去.
3、黑胶虫：可以穿透滤膜,也可以通过空气传播,低倍下为黑色点状,高倍下可看见黑色的小虫游来游去,培养液也是不浑的,一般不会太影响,细胞还是可以用的.常常是细胞生长状态良好,且观测到的运动物无明显增多,且培养液颜色、透明度无明显变化,可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象.对细胞生长状态不会有明显影响,在细胞增殖旺盛之后会自然消失,除更换血清外无须特殊处理.
4、真菌：一般培养液清亮,不变色,镜下有丝状物,有些真菌开始很像死细胞碎片,只是它很多很多的小块很清楚,象珊瑚状,不象细胞碎片分不清,慢慢的会长出很细的黑色丝状物.真菌生长的比较慢,不象细菌那么容易被发现,但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了,也很难救活了.
5、原虫：培养液可轻微浑浊,显微镜下那些细小的点状物数量非常多,轻微活动,细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢,而且细胞状态不好,边缘不清楚,细胞不透亮.他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养.这种共生是非常普遍的,但他们的数量小,细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长,只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长,最终形成恶性循环.
6.病毒：组织细胞培养过程中,如果没有除去潜在的病毒,就会产生病毒污染.目前,从原代猴肾细胞的培养中已发现不少于20种血清性病毒.尽管病毒污染的细胞不影响原代培养,但生产疫苗是不安全的.因此,潜在病毒是细胞大量生产和疫苗、干扰素等生物制品制作中的难题 。
7、非同种细胞污染 ：即是细胞交叉污染,由于细胞培养操作时各细胞株所需的器材和溶液没有严格分开,往往会使一种细胞被另一种细胞污染.目前,世界上已有几十种细胞都被HeLa细胞所污染,致使许多实验宣告无效.非细胞培养物所造成的化学成分的污染也偶有发生,大多是由于细胞培养所需物品清洗消毒不彻底而带入一些有毒化学物质所致.

㈦ 细胞培养时怎样防止真菌污染

无菌操作一步都不能含糊，一旦真菌感染，所用的器皿，试剂全部更换，培养箱彻底清理

㈧ 培养的细胞疑似被真菌污染

你加入双抗复肯定是没有制用的，双抗仅仅是针对细菌而不是真菌。如果你实在不能重新复苏新的细胞来培养的话，建议你在培养基中使用两性霉素。可以抑制真菌的生长，这样通过不停地传代稀释后，可能会去除真菌的污染（不是绝对的）。
此外，如果你的培养的细胞中的真菌是在细胞培养瓶的局部而且你是用的是玻璃培养瓶，你可以考虑把可以看到真菌的那个部位在火焰上烤几秒钟，可以烧死真菌，也会死掉一部分细胞。
以上的办法确实是无奈之举，追好的办法，还是你换新的细胞吧。
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㈨ 求问养细胞时，被细菌、真菌污染了怎么检测啊

细菌、真来菌污染常在传代源、换液、加样等开放性操作之后发生，而且增生迅速，若有污染，在48小时内可明显观察到，例如培养液变混浊，或略加振荡有很多漂浮物漂起。
(2)镜下观察
在倒置显微镜的高倍镜下可见培养液中有大量圆球状颗粒漂浮，即为细菌污染。若细胞之间有丝状、管状、树枝状或卵形的物质常为真菌污染。
采用普通肉汤接种或用未加双抗药物的培养液接种，也可发现是否有污染。

㈩ 细胞培养时为了防真菌污染需要加什么样的抗生素

通常用两性霉素B (Fungizone)
两性霉素B是一种对真菌有抗菌活性的抗生素.将其作为一种抗真菌、抗酵母菌以及抗霉菌制剂使用.它通过与固醇结合,干扰敏感真菌的细胞膜渗透性.通常的有效浓度是2.5μg/ml,在30μg/ml时有细胞毒性.
此外也可以选择在培养基里加3u/ml的制霉菌素或放线菌素D.
真菌污染是个很麻烦的事,很难彻底消除,建议重新复苏细胞或从新分离或购买细胞.
在细胞培养中未见有用灰黄霉素的,用法与用量不详.