菌株被污染

A. 菌落总数的计算

1、计数时应选取菌落数在30~之间的平板（SN标准要求为25~250个菌落），若有二个稀释度均在30~300之间时，按国家标准方法要求应以二者比值决定，比值小于或等于2取平均数，比值大于2则其较小数字（有的规定不考虑其比值大小，均以平均数报告）。

2、若所有稀释度均不在计数区间。如均大于300，则取最高稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。如均小于30，则以最低稀释度的平均菌落数乘稀释倍数报告之。如菌落数有的大于300，有的又小于30，但均不在30~300之间，则应以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。

如所有稀释度均无菌落生长，则应按小于1乘以最低稀释倍数报告之。有的规定对上述几种情况计算出的菌落数按估算值报告。

3、不同稀释度的菌落数应与稀释倍数成反比（同一稀释度的二个平板的菌落数应基本接近），即稀释倍数愈高菌落数愈少，稀释倍数愈低菌落数愈多。

如出现逆反现象，则应视为检验中的差错（有的食品有时可能出现逆反现象，如酸性饮料等），不应作为检样计数报告的依据。

4、当平板上有链状菌落生长时，如呈链状生长的菌落之间无任何明显界限，则应作为一个菌落计，如存在有几条不同来源的链，则每条链均应按一个菌落计算，不要把链上生长的每一个菌落分开计数。

如有片状菌落生长，该平板一般不宜采用，如片状菌落不到平板一半，而另一半又分布均匀，则可以半个平板的菌落数乘2代表全平板的菌落数。

5、当计数平板内的菌落数过多（即所有稀释度均大于300时），但分布很均匀，可取平板的一半或1/4计数。再乘以相应稀释倍数作为该平板的菌落数。

6、菌落数的报告，按国家标准方法规定菌落数在1~100时，按实有数字报告，如大于100时，则报告前面两位有效数字，第三位数按四舍五入计算。固体检样以克（g)为单位报告，液体检样以毫升（ml）为单位报告，表面涂擦则以平方厘米（cm）报告。

食品的样品稀释度分别是1；10和1；100 结果是200和300 。则平板总数为2000cfu/ml。

1；10稀释度菌落数是156.96？结果是1569.6 cfu/ml。

1；100稀释度菌落数是34.42 ？ 结果是3442 cfu/ml。

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菌落总数 的作用：

菌落主要作为判定食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌对食品被污染程序的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据

菌落总数的危害

食品的菌落总数严重超标，说明其产品的卫生状况达不到基本的卫生要求，将会破坏食品的营养成分，加速食品的腐败变质，使食品失去食用价值。消费者食用微生物超标严重的食品，很容易患痢疾等肠道疾病，可能引起呕吐、腹泻等症状，危害人体健康安全。

B. 做专利保藏的菌株可以接种回来吗手头的菌似乎污染了！谢谢！菌种保藏中心的电话总也打不通！

做专利保藏的菌株，应该可以取一点接种回来吧。保藏的菌种也需要定期进行复壮的。至于菌种保藏中心电话打不通。可以多打几次。再一个可以亲自跑一趟啊。

C. 多环芳烃菲在染料、杀虫剂等生产过程中被广泛使用，是土壤、河水中常见的污染物之一．如图表示科研人员从

（1）步骤①→③的培养过程中，需将锥形瓶放在摇床上振荡，目的有两个，一方面使菌株与培养液充分接触，提高营养物质的利用率；另一方面能增加培养液中的溶氧量．
（2）步骤④用平板划线法纯化菌株Q过程中，由于线条末端细菌的数目比线条起始处要少，所以在做第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线．采用固体平板培养细菌时要倒置培养的目的是防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基．
（3）接种环在每次接种前和接种结束后都要通过灼烧来灭菌，所以完成步骤④中5次划线操作前都要灼烧灭菌，接种结束后还需灼烧灭菌1次，防止造成污染，由此可见，完成步骤④共需灼烧接种环6次．
（4）本实验的目的是比较两种菌株降解多环芳烃菲的能力．实验设计需要遵循对照原则，对照组需加入等量无菌水；还需遵循单一变量原则，单一变量是菌种类比不同，即菌株Q菌液和突变株K菌液，所以实验设计如下：
①取9只锥形瓶均分成三组，编号A、B、C
②向9支锥形瓶中分别加入等量以多环芳烃菲为唯一碳源的培养液．
③向A、B、C三组培养液中分别加入等量的无菌水、菌株Q菌液和突变株K菌液．
④28℃恒温培养3天后，测定锥形瓶中多环芳烃菲的降解率．
故答案为：
（1）增加培养液中的溶氧量（或增加培养液中的含氧量）
（2）线条末端细菌的数目比线条起始处要少（或能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落）
防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基（或避免培养基中水分的过快挥发）
（3）6
（4）②等量的以多环芳烃菲为唯一碳源
③等量的无菌水、菌株Q菌液和突变株K菌液
④锥形瓶中多环芳烃菲的降解率

D. 如何从污染环境中筛选得到高效脱氮脱磷的微生物菌株并获得功能基因

从含氮、磷污染物丰富的地方取样，经富集培养后，用鉴别性培养基进行稀释分离培养，初步筛选后还需对所得菌落进一步进行效能鉴定等。

E. 有机磷化合物在农业生产中作为杀虫剂被广泛使用，长期以来因使用其量大、范围广，容易造成水体污染等诸多

解；（1）由题意可知，筛选甲胺磷的降解细菌，可以用以甲胺磷为唯一碳源（氮源）的培养基，这样只有能分解甲胺磷的微生物生长，其他微生物因缺乏碳源（氮源）而不能生长．
（2）蛋白质合成的场所是核糖体；测定酶活性的方法是单位时间内反应物的减少量或生成物的增加量，由于题目中不知道甲胺磷降解的产物是什么，所以只能用单位时间内甲胺磷的减少量来表示酶的活性大小．
（3）由不同浓度甲胺磷溶液的吸光值的标准曲线可知，吸光值越大，对于的甲胺磷溶液的浓度越大，对于表格中的数据来说，吸光值越大，甲胺磷被降解的越少，所以细菌对甲胺磷降解率高的对应的吸光值小，因此吸光值在0.49时降解率最大=100-25/100=75%；如果甲胺磷自身也会分解，则计算的降解率数值会偏大．
（4）扩增菌株A的DNA可以用PCR技术．
（5）为了避免转基因烟草的花粉对野生型烟草造成基因污染，可将ophc2基因导入烟草细胞叶绿体中．
故答案应为：
（1）以甲胺磷为唯一碳源（氮源） 选择（2）核糖体 甲胺磷的降解量
（3）75% 偏大（4）PCR（5）叶绿体

F. 多环芳烃菲在染料、杀虫剂等生产过程中被广泛使用，是土壤、河水中常见的污染物之一．下图表示科研人员从

（1）因为菌株Q能降解多环芳烃菲，所以步骤①→③的培养过程中，培养液中加入多环芳烃菲作为唯一碳源，目的是筛选出菌株Q．
（2）步骤①→③的培养过程中，需将锥形瓶放在摇床上振荡，目的有两个，一方面使菌株与培养液充分接触，提高营养物质的利用率；另一方面能增加培养液中的溶氧量．
（3）步骤④用平板划线法纯化菌株Q过程中，由于线条末端细菌的数目比线条起始处要少，所以在做第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线．采用固体平板培养细菌时要倒置培养的目的是防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基．
（4）接种环在每次接种前和接种结束后都要通过灼烧来灭菌，所以完成步骤④中5次划线操作前都要灼烧灭菌，接种结束后还需灼烧灭菌1次，防止造成污染，由此可见，完成步骤④共需灼烧接种环6次．
（5）本实验的目的是比较两种菌株降解多环芳烃菲的能力．实验设计需要遵循对照原则，对照组需加入等量无菌水；还需遵循单一变量原则，单一变量是菌种类比不同，即菌株Q菌液和突变株K菌液，所以实验设计如下：
①取9只锥形瓶均分成三组，编号A、B、C
②向9支锥形瓶中分别加入等量以多环芳烃菲为唯一碳源的培养液．
③向A、B、C三组培养液中分别加入等量的无菌水、菌株Q菌液和突变株K菌液．
④28℃恒温培养3天后，测定锥形瓶中多环芳烃菲的降解率
故答案为：
（1）筛选出菌株Q
（2）增加培养液中的溶氧量
（3）线条末端细菌的数目比线条起始处要少防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基（或避免培养基中水分的过快挥发）
（4）6
（5）②向9支锥形瓶中分别加入等量以多环芳烃菲为唯一碳源的培养液
③向A、B、C三组培养液中分别加入等量的无菌水、菌株Q菌液和突变株K菌液

G. “鸡枞菌”人工种植方法。

“鸡枞菌”人工种植方法：

1、棚内温度应保持在25℃～30℃之间，昼夜温差控制在10℃左右，地温控制在25℃～27℃之间，空气湿度保持在90％左右。

2、当给予一定量的散射光时，光强控制在300勒克斯左右。

3、温度过高时，打开排气扇降温，温度过低，降低保温被子以提高棚内温度，当细菌床干燥时，可在菌床与细菌床之间的过道上浇水，以增加细菌床的湿度。

4、鸡枞菌通常在六月至十月在夏季及秋季产生。温度控制在24℃－28℃是合适的．温度高时，棚顶增厚，遮阳，沟浅，蓄水，棚内空间早晚喷，保持空气湿润。此外，还可以增加昼夜温湿度差，提高细菌质量。

(7)菌株被污染扩展阅读：

人工栽培鸡㙡菌袋生产60天成熟，每平方米产鲜菌4．85公斤。人工栽培鸡枞技术操作简单，原材料来源广泛，生育期短，产出率高，可开发加工油鸡枞等产品，市场前景好。

鸡枞菌的生长发育与土白蚁的活动有密切关系。白蚁一旦弃巢他去，此巢就不会再长鸡㙡菌。人工栽培很难成功。

鸡枞菌与大白蚁共生的鸡菌是人们的珍稀佳肴，是饲养大白蚁的一项重要收入。每年5月下旬至10月上旬为鸡枞菌的生长期，可经常采摘侧枝较大的鸡菌。当菌盖破膜开伞达八成、未展平，盖面有鳞裂但盖边未出现撕裂时，即及时采收。

H. 食物发霉高温加热后还能吃吗

食物发霉，抄高温加热后也不能食用。霉变食物中含有黄曲霉毒素，其主要成分是脂溶性的而非水溶性的，它在水中的溶解度很低，且裂解温度为280℃以上，一般的水洗和烹调加工温度不能将其破坏。
1993年，黄曲霉毒素就被世界卫生组织（WHO）的癌症机构划定为一类致癌物，有很强的毒性与致癌性，其毒性比砒霜大68倍，对肝脏器官损害严重，容易对食品造成污染，从而危害人类的健康。黄曲霉素主要存在于霉烂的谷物、玉米、花生中，该菌在温暖，潮湿的环境下易于生长繁殖，这种因素是导致亚洲、非洲某些地区癌肿高发的重要原因。

黄曲霉毒素（AFT）是黄曲霉和寄生曲霉等某些菌株产生的双呋喃环类毒素。其衍生物有约20种，分别命名为B1、B2、G1、G2、M1、M2、GM、P1、Q1、毒醇等。其中以B1的毒性最大，致癌性最强。动物食用黄曲霉毒素污染的饲料后，在肝、肾、肌肉、血、奶及蛋中可测出极微量的毒素。黄曲霉毒素及其产生菌在自然界中分布广泛，有些菌株产生不止一种类型的黄曲霉毒素，在黄曲霉中也有不产生任何类型黄曲霉毒素的菌株。黄曲霉毒素主要污染粮油及其制品，各种植物性与动物性食品也能被污染。

I. 如何筛选或选育抗某种杂菌的新菌株来预防 污染发生

比较简单的方法就是抑菌圈法，把杂菌当做指示菌，制备指示菌平板，打孔器打孔，将疑似有抑制效果的新菌发酵液加入孔中，形成抑菌圈的就是抗杂菌菌株。

J. 我有红薯淀粉很多年了没变质很好还能吃吗

红薯淀粉跟面粉，米粉一样多有保质期的，况且淀粉里面含有微量水份，专你放在再干燥再属密闭的容器里，它本来的微量水份，放的时间长了好几年了肯定会有霉菌产生，肉眼看不到和鼻子闻不到不能确定淀粉没有霉变，万一霉变了产生黄曲霉素，那是很毒的，建议你还是不要再食用为好。