培养基污染

❶ 培养基污染了怎么解决

如果是被菌污染,一般情况下是直接倒掉（带上口罩等）,当然不能跟接种室、培养室等靠的太近,很少甚至没有人会去“消毒”处理,特别是对企业,因为他们不会为这个花钱钱的

❷ 细胞污染在培养基里细菌多长时间

而支原体是牛血清中最常见的微生物之一、霉菌，可有不同的外形，可以增加细胞的种板密度、原虫，根据感染细菌的不同。 6：可能原因很多比如配液消毒问题，但时间长之后，有些真菌开始很像死细胞碎片;取材\，检查一下培养基和器材。，37度孵箱培养2-3天：可以穿透滤膜，建议舍弃该污染细胞，使其蒸汽弥漫、检测细胞某项指标前一定要撤去双抗，仍清亮，也很难救活了,可以防止霉菌污染，但出现絮状杂质、透明度无明显变化，箱壁），以提高细胞的生存率，且观测到的运动物无明显增多，细胞不透亮，如果只是个别污染、真菌，可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象，只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长，好象多为多形、孵箱应定期用三氧机消毒 或者 紫外光照射：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外灯照、支原体、超净台的风机不能过大，尤其在多雨的季节，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物、黑蛟虫：培养液是清亮的，培养液一般会浑浊变黄;培养液\，压力足够。但双抗有时会影响细胞的状态，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板。孵箱应定期清洁（2月左右），用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内。 CO2孵箱被霉菌污染后，再移入细胞，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。 1，是否在高压灭菌时放气时间足够，可把所有细胞暂时转移，可在培养基里加3u/。 其它培养箱清洗方法是，但可用于细胞培养，可用同等量的氨水喷洒中和。并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时。他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。 也可以在培养基中事先加入双抗（硫酸链霉素和氨苄青霉素），慢慢的会长出很细的黑色丝状物，对细胞生长影响明显，不象细菌那么容易被发现：黑色的，除更换血清外无须特殊处理、操作问题，不变色、超净台\，细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象。真菌生长的比较慢，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，细胞仍可生长，很难挽救。预防霉菌污染。仔细检查一下器皿的灭菌情况，不象细胞碎片分不清，培养液一般培养液一般会浑浊，但他们的数量小，如果所有细胞都污染，轻微活动，最终形成恶性循环，也可以通过空气传播，可能是系统污染，培养液也是不浑的！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，边缘不清楚，倒置显微镜下无杂质。如果没有细菌生长 就是操作的问题：一般培养液清亮;培养瓶\，原体感染，可能是操作问题，以避免影响实验结果，而且细胞状态不好。常常是细胞生长状态良好，无任何不良反应。而且它不能用过滤的用泰乐菌素，可看到明显的菌丝，细胞还是可以用的、环境问题等等 关于培养基的无菌状况。 4。这种共生是非常普遍的，一定要注意，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了，只是它很多很多的小块很清楚，所以在做转染;ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗。或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体，且培养液颜色！可在培养液中加相应的抗生素处理 2，象珊瑚状，在细胞增殖旺盛之后会自然消失。建议如果细胞有可能是此种污染的话。 5，细胞的活力状态变差，制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补。待过氧乙酸的气味消散后，细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢，37度试培养一段时间后观察，约几小时即可进入操作。污染的可能原因，风机到6-8格，取培养基至培养瓶中（不加细胞）；但细胞一旦污染，将环境彻底消毒，高倍下可看见黑色的小虫游来游去。否则也可能能致霉菌污染 4：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状细胞培养中常见的污染情况总结如下、无菌室经甲醛熏蒸消毒后，一般不会太影响;器材\：培养液可轻微浑浊;操作等因素 3，兽用支原体病的药，并用酒精和新洁尔灭试擦孵箱同时孵箱内的水应是三蒸水 2: 1。对细胞生长状态不会有明显影响，镜下有丝状物、细菌，就要注意操作 3，低倍下为黑色点状，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，显微镜下那些细小的点状物数量非常多

❸ 困惑：细胞及培养基是被细菌污染了吗

细胞培养中常见的污染情况总结如下:
1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗生素处理
2、霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。 CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。待过氧乙酸的气味消散后，再移入细胞。孵箱应定期清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。 其它培养箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外灯照。
预防霉菌污染，可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗；但细胞一旦污染，很难挽救，制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补，建议舍弃该污染细胞。，将环境彻底消毒，如果所有细胞都污染，可能是系统污染，检查一下培养基和器材，如果只是个别污染，可能是操作问题，就要注意操作
3、支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。而且它不能用过滤的用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。
4、黑蛟虫：可以穿透滤膜，也可以通过空气传播，低倍下为黑色点状，高倍下可看见黑色的小虫游来游去，培养液也是不浑的，一般不会太影响，细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良好，且观测到的运动物无明显增多，且培养液颜色、透明度无明显变化，可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。对细胞生长状态不会有明显影响，在细胞增殖旺盛之后会自然消失，除更换血清外无须特殊处理。建议如果细胞有可能是此种污染的话，可以增加细胞的种板密度，以提高细胞的生存率。
5、真菌：一般培养液清亮，不变色，镜下有丝状物，有些真菌开始很像死细胞碎片，只是它很多很多的小块很清楚，象珊瑚状，不象细胞碎片分不清，慢慢的会长出很细的黑色丝状物。
真菌生长的比较慢，不象细菌那么容易被发现，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了，也很难救活了。
6、原虫：培养液可轻微浑浊，显微镜下那些细小的点状物数量非常多，轻微活动，细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢，而且细胞状态不好，边缘不清楚，细胞不透亮。他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。这种共生是非常普遍的，但他们的数量小，细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长，只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长，最终形成恶性循环。
污染的可能原因：可能原因很多比如配液消毒问题、操作问题、环境问题等等

关于培养基的无菌状况，取培养基至培养瓶中（不加细胞），37度试培养一段时间后观察。如果没有细菌生长 就是操作的问题。
也可以在培养基中事先加入双抗（硫酸链霉素和氨苄青霉素）。但双抗有时会影响细胞的状
态，所以在做转染、检测细胞某项指标前一定要撤去双抗，以避免影响实验结果。
1、孵箱应定期用三氧机消毒 或者 紫外光照射，并用酒精和新洁尔灭试擦孵箱同时孵箱内的水应是三蒸水
2、超净台\取材\器材\培养液\培养瓶\操作等因素
3、超净台的风机不能过大，风机到6-8格。否则也可能能致霉菌污染
4、无菌室经甲醛熏蒸消毒后，可用同等量的氨水喷洒中和，约几小时即可进入操作。

❹ 污染是培养基质量不好引起的吗

（1）培养基不是无菌产品,但有菌落数量控制.
（2）培养基在使用前通过高压或过滤灭菌.
（3）防止污染应该注意以下事项：A.从污染的源头开始 确认工作细胞库是否被污染：用细菌、真菌及支原体无菌试验来确认并排除.同时要对无菌试验培养基的灵敏度进行验证.确认毒种工作种子批是否被污染：用细菌、真菌及支原体无菌试验来确认并排除.同时要对无菌试验培养基的灵敏度进行验证.确认所用培养基及其添加成分（如小牛血清、NaHCO3等）是否被污染：用细菌、真菌及支原体无菌试验来确认并 排除.同时要对无菌试验培养基的灵敏度进行验证.实际生产中,可以从配制好的培养液中取少量加入营养琼脂于恒温培养箱内培养,48小时即可观察有无污染.一些单位在使用血清时候往往不经过过滤除菌处理便直接加入到培养液中,可能带来污染.其它：高压灭菌设备、过滤除菌设备均应进行验证,确保灭菌和除菌效果；前者应在投产前及其后的每6个月进行验证,后者应在每次除菌前、后进行验证工作（至 少应在除菌后进行一次）.另外,应将有毒区与无毒区严格分开,并有各自独立的空气净化系统及孵室,有毒区对无毒区应保持相对负压,防止病毒对培养细胞（尤其是细胞库）的污染.B.从GMP管理、SOP操作方面加强管理力度 每二周（或每周）对无菌操作室及洁净区域按GMP要求进行检测 人员的GMP管理和无菌操作强化培训 C.一些特殊情况 细菌的大小从0.1-700m,为防止细小细菌的污染,过滤除菌应尽量采用0.1m的滤膜或滤芯.大面积污染时,应对所有设施、用具及操作环境进行彻底消毒.

❺ 培养基受到了污染，如何判断它是细菌污染还是真菌污染

细菌菌落较小，形状表面或光滑黏稠，或粗糙干燥，易挑起，多为白色；
真菌落较大、菌丝细长，菌落疏松，呈绒毛状、蜘蛛网状、棉絮状，无固定大小，多有光泽，不易挑，有时还呈现红色、褐色、绿色、黑色、黄色等不同的颜色（孢子的颜色）
看菌落一般大致可以看出，
要是还是看不出，就镜检。常见的真菌酵母霉菌，很容易看出。最常见的污染就是霉菌了。

❻ 培养基的污染可能来源有哪些方面

接种时空气污染，培养液消毒时间不够

❼ 如何判断培养基是否污染

固体培养基可以37摄氏度培养24h观察有无杂菌生长；液体培养基可以无菌操作取0.1ML涂布到无菌蛋白栋牛肉膏培养基上37摄氏度培养24h观察有无杂菌生长.

❽ 污染是培养基质量不好引起的吗

博凌科为生物科技-为你解答：1）培养基不是无菌产品，但有菌落数量控制。 （2）培养基在使用前通过高压或过滤灭菌。 （3）防止污染应该注意以下事项： A.从污染的源头开始 确认工作细胞库是否被污染：用细菌、真菌及支原体无菌试验来确认并排除。同时要对无菌试验培养基的灵敏度进行验证。 确认毒种工作种子批是否被污染：用细菌、真菌及支原体无菌试验来确认并排除。同时要对无菌试验培养基的灵敏度进行验证。 确认所用培养基及其添加成分（如小牛血清、NaHCO3等）是否被污染：用细菌、真菌及支原体无菌试验来确认并 排除。同时要对无菌试验培养基的灵敏度进行验证。实际生产中，可以从配制好的培养液中取少量加入营养琼脂于恒温培养箱内培养，48小时即可观察有无污染。 一些单位在使用血清时候往往不经过过滤除菌处理便直接加入到培养液中，可能带来污染。 其它：高压灭菌设备、过滤除菌设备均应进行验证，确保灭菌和除菌效果；前者应在投产前及其后的每6个月进行验证，后者应在每次除菌前、后进行验证工作（至 少应在除菌后进行一次）。 另外，应将有毒区与无毒区严格分开，并有各自独立的空气净化系统及孵室，有毒区对无毒区应保持相对负压，防止病毒对培养细胞（尤其是细胞库）的污染。 B.从GMP管理、SOP操作方面加强管理力度 每二周（或每周）对无菌操作室及洁净区域按GMP要求进行检测 人员的GMP管理和无菌操作强化培训 C.一些特殊情况 细菌的大小从0.1-700m，为防止细小细菌的污染，过滤除菌应尽量采用0.1m的滤膜或滤芯。 大面积污染时，应对所有设施、用具及操作环境进行彻底消毒。

❾ 菌种污染的原因有哪些

在三级菌种生产的全过程中，常会发生杂菌污染。因此，必须高度重内视，严格无菌操容作，注意每个操作环节，尽可能不受或少受杂菌污染，使菌种成品率提高。
（1）培养基污染组成培养基的各种原料，本身不同程度地混有杂菌和杂菌孢子。如果消毒灭菌不彻底，培养5天左右，在培养基表面和内部就会同时发生杂菌。（2）菌种本身污染由于母种、原种本身不纯，污染上杂菌。当它们进行转接时，会造成大批污染。而且杂菌由转接种块上开始蔓延。这样的菌种坚决不能用。选择菌种要十分小心，有一点怀疑就不可采用。（3）操作污染在确认母种或原种纯度较高，而且在培养基已彻底灭菌的情况下，发现被转接的培养基表面（包括种块周围）出现杂菌污染时，说明接种室（箱）、用具、菌种瓶表面及操作人员的手和工作服等消毒处理得不好，或者违反了接种操作规程。（4）环境污染由于培养室消毒不彻底，或者菌种瓶棉塞潮湿，或者瓶口洗得不干净，常常造成培养后的杂菌污染。这种污染现象是在菌丝体已经长满斜面或菌种瓶后，在培养料表面出现杂菌，使接种后的菌种发霉，不能长耳。

❿ 怀疑培养基污染了 怎么办

可以将培养基装几毫升到15ml离心管，用封口膜封口，放培养箱24-48h观察培养基状态。