質粒部職責

1. 什麼叫質粒介導和染色體介導

首先講介來導，介——媒介，導——轉自導。理解否？

質粒介導，就是由質粒來作為媒介轉導某種物質；染色體介導，同理。

例如接合這個概念就可以幫你理解介導：接合是指細菌通過質粒介導和性菌毛連接溝通的細胞間接觸,將遺傳物質(質粒或染色體)從供體菌轉入受體菌。

2. 根據目的基因構建重組質粒的步驟

（1）用限制酶將質粒切割開形成黏性末端，用DNA連接酶將目的基因與質粒連接起來． （2）質粒的實質是環狀DNA，基本組成單位是脫氧核苷酸；由圖中限制酶切割位置可知，目的基因插入的位置是氨苄青黴素抗性基因中． （3）步驟③是基因工程第三步：將目的基因導入大腸桿菌（受體細胞）．為了促進該過程，用Ca 2+ 處理大腸桿菌，使之成為感受態細胞． （4）培養基C是選擇培養基，培養基中有四環素，專一篩選含四環素抗性基因的大腸桿菌，能在C中生長的大腸桿菌有兩種，分別是含有抗四環素基因、同時抗四環素基因和含氨苄青黴素基因的大腸桿菌． （5）D培養基中大腸桿菌能抵抗四環素和含氨苄青黴素，而E中只抗一種四環素，所以在E中對應區域（D中沒有菌落的部位），該處為轉基因大腸桿菌，結果如圖： 故答案為： （1）限制酶 DNA連接酶 （2）脫氧核苷酸 氨苄青黴素抗性 （3）將重組質粒（目的基因）導入大腸桿 菌（受體細胞） Ca 2+ （4）2 （5）E 如下圖所示（兩點全圈出給分）． （1）限制酶 DNA連接酶 （2）氨苄青黴素抗性 （3）將重組質粒導入大腸桿菌（受體細胞） Ca 2+ （4）含四環素抗性基因的大腸桿菌 2 （5）E

3. Ti質粒的轉化有哪些機理

根癌農桿菌之所以會感染植物根部是因為植物根部損傷部位會分泌出酚類物質專——乙醯丁香酮屬和羥基乙醯丁香酮，這些酚類物質能誘導Ti質粒上的emphasis：role=italicviremphasis基因以及根癌農桿菌染色體上的一個操縱子表達。emphasis：role=italicviremphasis基因產物將Ti質粒上的T-DNA單鏈切下，而根癌農桿菌染色體上的操縱子表達產物則與單鏈T-DNA結合形成復合物，轉化植物根部細胞。

整個過程大致可分為以下幾個步驟：①根癌農桿菌對植物細胞的識別和附著；

②根癌農桿菌對植物信號物質的感受；

③根癌農桿菌Ti質粒上的emphasis：role=italicviremphasis基因以及染色體上操縱子的活化；

④T-DNA復合體的產生；

⑤T-DNA復合體的轉運；

⑥T-DNA整合到植物基因組中。

4. 什麼是F質粒

質粒（plasmid）是細菌、酵母菌和放線菌等生物中染色體（或擬核）以外的DNA分子，存在於細胞質中，具有自主復制能力，使其在子代細胞中也能保持恆定的拷貝數，並表達所攜帶的遺傳信息，是閉合環狀的雙鏈DNA分子。

質粒不是細菌生長繁殖所必需的物質，可自行丟失或人工處理而消除，如高溫、紫外線等。質粒攜帶的遺傳信息能賦予宿主菌某些生物學形狀，有利於細菌在特定的環境條件下生存。

質粒(plasmid) 廣泛存在於生物界，從細菌、放線菌、絲狀真菌、大型真菌、酵母到植物，甚至人類機體中都含有。從分子組成看，有DNA 質粒，也有RNA 質粒; 從分子構型看，有線型質粒、也有環狀質粒: 其表型也多種多樣。細菌質粒是基因工程中最常用的載體。

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質粒具有自主復制能力，使其在子代細胞中也能保持恆定的拷貝數，並表達所攜帶的遺傳信息。細菌質粒是DNA重組技術中常用的載體。載體是指把一個有用的外源基因通過基因工程手段，送進受體細胞中去進行增殖和表達的工具。

將某種目標基因片段重組到質粒中，構成重組基因或重組體。然後將這種重組體經微生物學的轉化技術，轉入受體細胞(如大腸桿菌)中，使重組體中的目標基因在受體菌中得以繁殖或表達，從而改變寄主細胞原有的性狀或產生新的物質。

質體與染色體最主要的區分是，質體不是細胞生存所必需，染色體則是細胞生存必需的。大部分的質體都是環狀分子，但是也有少數屬於線狀分子，它存在於許多細菌以及酵母菌等生物中，乃至於植物的線粒體等胞器中。

5. 質粒,芽孢的概念及特點

質粒（Plasmid）是附加到細胞中的非細胞的染色體或核區DNA原有的能夠自主復制的較小的DNA分子（即細胞附殖粒、又胞附殖粒）。大部分的質粒雖然都是環狀構形，然而目前也發現有少數的質粒屬於線性構形，它存在於許多細菌以及酵母菌等生物中，乃至於植物的線粒體等胞器中。
http://ke..com/view/20005.htm

芽孢的定義 芽孢——特殊的休眠構造 英文名稱：spore ，endospore 有些細菌（多為桿菌）在一定條件下，細胞質高度濃縮脫水所形成的一種抗逆性很強的球形或橢圓形的休眠體。對多數細菌來說1個菌體細胞只形成1個芽孢，但有些菌體會生成兩個芽孢，如堅強芽孢桿菌，有的在細胞一端生成，有的在細胞中部生成。由於芽孢是在細胞內形成的，所以也常稱之為內生孢子，亦稱芽孢。每一細胞僅形成一個芽孢，所以其沒有繁殖功能。
http://ke..com/view/44590.htm

6. 質粒是如何進行自我復制的

質粒,就是一個環狀的雙鏈DNA分子.
質粒的復制,也是半保留復制.復制時,雙鏈局部解開,啟動子鏈的合成,子代DNA鏈合成完畢後,分別與親代DNA鏈組成兩個環狀的DNA分子.
質粒的復制呈現θ型.

7. 質粒圖譜怎麼看

1.第一步，看箭頭：

大多數質粒都會有箭頭，箭頭有兩種解釋。一種是轉錄方向，轉錄方向主要是由啟動子開始的一個大箭頭，是啟動子啟動序列的順序。另一種是復制起始位點的方向，復制起始位點就是該質粒在大腸桿菌等細菌或真菌中DNA復制的一個方向。

還需要提到的是F1啟動子（圖上的f1 ori）代表的是噬菌體的復制起始方向，只能復制出單鏈的DNA哦，但是可以用來測序。看懂轉錄的方向，這樣就方便設計插入片段的位置和方向性。

2.第二步，看上面的標簽。

報告基因：通常會有一兩個蛋白，被用作報告基因，比如常見的copGFP（綠色熒光蛋白），Puro（嘌呤黴素），Lacz（乳糖操縱子）等等。和抗性基因不同，這樣的報告基因，並不是為了在大腸桿菌擴增質粒的過程中起作用的。

而是在質粒轉入表達體系後起到作用的，基本上就是為了顯示過表達或是敲減的基因是否正常運作。有的報告基因會融合在蛋白中表達，有的會另外用一個獨立的啟動子進行表達（比如shRNA的質粒中）。

3.第三步，看多克隆位點：

MCS（Multiple Cloning Site，也就是多克隆位點），一般圖中會把多克隆位點上的酶切位點都標記出來。上面的酶切位點順序，一般都是按照5`-3`的順序排列下來的，需要注意的是這樣幾點。

第一點是要注意，酶切位點邊標注了*的一般是指並不僅僅存在一個位點，也就不能用來作為構建質粒的酶切位點。

第二點需要注意的是，有的酶切位點，在序列中只有一個，但它上面也會標注一個*或者（dam），這說明可能這個酶切位點會有CpG島的甲基化修飾[常見的是XbaI，TCTAG(6m)A中的TC無法切開]，一般也是不能用的。但是非要用這個酶切位點的話，就需要用非甲基化的感受態細胞，如JM109或者JM110。

4.第四步，看多克隆位點的序列：

末端如果有差異的話，可以把基因的ATG（甲硫氨酸）的5`末端替換1-2個鹼基（變成GTG或者GCG這樣），從第二個氨基酸序列開始完全一致即可。而配合擴增和酶切的話，插入片段是允許有3`末端的冗餘。

為了可以應付3`末端的冗餘鹼基，在多克隆位點序列後，會有解碼的終止TAA密碼，即使插入的片段使得3`末端產生了移碼突變，照樣能使表達的蛋白正常終止掉（在酵母雙雜的AD質粒中，由於插入的是隨機cDNA，所以AD的載體上會常見這樣的結構）。

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分類

1.根據質粒能否通過細菌的接合作用，可分為接合性質粒和非接合性質粒。

接合性質粒帶有與接合傳遞有關的基因。非接合質粒在一定條件下通過與其共存的接合質粒的誘動或轉導而傳遞。

2.根據質粒在細菌內的復制類型可分為兩類：嚴緊控制型和鬆弛控制型。

嚴緊控制復制型質粒的復制酶系與染色體DNA復制共用，只能在細胞周期的一定階段進行復制，當細胞染色體停止復制時，質粒也就不再復制。

鬆弛控制復制型的質粒的復制酶系不受染色體DNA復制酶系的影響，在整個細胞生長周期中隨時都可以復制，在染色體復制已經停止時質粒仍能繼續復制。

3.根據質粒的不相容性，可分為不相容性和相容性。

不相容性指結構相似、密切相關的質粒不能穩定地共存於同一宿主細菌內的現象，反之為相容性。常用於流行病學的調查。

8. 質粒與病毒的區別

質粒
質粒是染色體外能夠進行自主復制的遺傳單位，包括真核生物的細胞器和細菌細胞中染色體以外的脫氧核糖核酸(DNA)分子。現在習慣上用來專指細菌、酵母菌和放線菌等生物中染色體以外的DNA分子。在基因工程中質粒常被用做基因的載體。

目前，已發現有質粒的細菌有幾百種，已知的絕大多數的細菌質粒都是閉合環狀DNA分子(簡稱cccDNA)。細菌質粒的相對分子質量一般較小，約為細菌染色體的0.5%～3%。根據相對分子質量的大小，大致上可以把質粒分成大小兩類：較大一類的相對分子質量是40×106以上，較小一類的相對分子質量是10×106以下(少數質粒的相對分子質量介於兩者之間)。每個細胞中的質粒數主要決定於質粒本身的復制特性。按照復制性質，可以把質粒分為兩類：一類是嚴緊型質粒，當細胞染色體復制一次時，質粒也復制一次，每個細胞內只有1～2個質粒；另一類是鬆弛型質粒，當染色體復制停止後仍然能繼續復制，每一個細胞內一般有20個左右質粒。一般分子量較大的質粒屬嚴緊型。分子量較小的質粒屬鬆弛型。質粒的復制有時和它們的宿主細胞有關，某些質粒在大腸桿菌內的復制屬嚴緊型，而在變形桿菌內則屬鬆弛型。

病毒：是一類沒有細胞結構但有遺傳復制等生命特徵，主要由核酸和蛋白質組成的大分子生物。病毒沒有細胞結構
質粒不是病毒，只是細胞中除了染色體之外的DNA,使細胞的組成成分。而病毒可能是DNA,RNA,或蛋白質，使細胞的入侵者

9. 質粒是如何進行自我復制的

質粒，就是一個環狀的雙鏈DNA分子。

質粒的復制，也是半保留復制。復制時，雙鏈局部解開，啟動子鏈的合成，子代DNA鏈合成完畢後，分別與親代DNA鏈組成兩個環狀的DNA分子。

質粒的復制呈現θ型。