細胞培養污染

1. 如何預防和去除細胞培養過程中的污染

試用中心實驗方法資訊采購保障中心品牌專區NSFC如何預防細胞培養的污染問題2009-10-11 00:00體外培養的細胞受到嚴重污染時，有時即使想盡各種辦法也難以挽回。因此，防止污染，預防是關鍵。只有將預防措施貫穿於整個細胞培養的始終，才能將發生污染的可能性降到最小程度。一般預防可從以下幾方面著手：1、從物品、用品消毒滅菌著手細胞培養所用物品清洗、消毒要徹底，各種溶液滅菌除菌要仔細，並在取樣檢菌一周後確認無菌才能使用。同時，在無菌過濾操作中，隨著濾過體積的增大，濾膜破損的可能性增加，故應選擇最後過濾的液體進行檢測。定期對二氧化碳培養箱進行消毒。具體操作：75%的酒精搽拭培養箱後，使用可移動的紫外燈至少消毒 30min，加入高壓滅菌過的超純水於培養箱水槽中保持濕度。也可配製300ml的飽和硫酸銅加3L滅菌超純水混合成硫酸銅溶液加入水槽中。2、添加抗生素各種抗生素性質不同，對各種微生物的作用也不同，聯合應用比單用效果好，預防性應用比污染後使用好。但反復使用抗生素會使微生物產生耐葯性，且對細胞本身也有一定影響，因此為避免誘導抗葯細菌，應定期更換培養系統中的抗生素，或盡可能不用抗生素處理。3、從操作者做起（1）進無菌室前要徹底洗手，按規定穿隔離衣。開始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。（2）操作者動作要輕，安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應在火焰近處並經過燒灼進行。但要注意，金屬器械不能在火焰中長時間燒灼，以防退火；燒過的器械要冷卻後才能使用；已吸過培養液的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管內的培養液成分如蛋白質等燒焦後會產生有害物質，吸管再用時會將其帶到培養液中；膠塞、橡皮乳頭及塑料的細胞培養用品過火焰是也不能時間太長，以免燒焦產生有毒氣體，危害培養細胞，同時塑料細胞培養用品也會產生變形影響使用。（3）操作時盡量不要談話，咳嗽以防止來自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。（4）使用培養液前不宜過早開瓶，開瓶後的培養液應保持斜位，避免直立，以防止下落細菌的污染。不再使用的培養液應立即封閉瓶口，培養的細胞在處理之前勿過早暴露在空氣中。（5）操作完畢後應整理好工作檯面，用消毒水浸泡的紗布擦拭檯面。（6） 吸取培養液、細胞懸液時，應專管專用，一旦發現吸管口接觸了手和其他污染物品應棄去，以防止污染擴大或造成培養物之間的交叉污染。4、防止細胞交叉污染所有從別處轉來的或是自己所建的細胞系都要早期留有的充足的凍存儲備，一旦懷疑發生交叉污染，可做細胞遺傳學方面的鑒定，如發現原有的細胞遺傳物發生改變，可以復甦早期凍存的細胞使用。重要細胞系（株）的傳代工作應由兩人獨立進行。

2. 細胞培養箱污染怎麼處理

1. 培養箱消毒：先用純水擦洗，再用95的酒精擦洗，再照紫外就可以拉！注意周圍環境的清潔就不會那麼容易污染的拉！

2. 我的經驗是在補充水時最好把水加熱一下，達到培養箱的溫度。

3. 這么早就養細胞了，我們這里一般是用70％的乙醇擦洗，然後再用0.1％的新潔爾滅擦洗，不放心的話再用高錳酸鉀加甲醛1：1比例熏一遍。注意要是熏的話千萬注意混合之後馬上離開，然後密閉細胞培養室，味道很刺激的。最好在養細胞前消毒，否則，確實沒地方放細胞。

4. 我們的方法比較簡單，先用75%酒精擦拭內壁，通風10分鍾，紫外線照射30分鍾即可。

5. 我們的通常處理是先用75%的酒精擦拭內壁，然後用甲醛+高錳酸鉀熏蒸一個晚上，然後通風一整天（同時打開紫外線照射）。

6. 我們是把培養箱里的板層拿出來高壓一下，箱壁用75％酒精擦一遍，換用詩樂氏擦一遍，再紫外照一夜，效果很好，其他的請高手指教。

7. 熏蒸後吹一天是絕對不夠的，最起碼要一個星期才可以讓甲醛散盡，要不細胞長不好的

8. 有的培養箱能加熱內壁到90度，也有的帶有紫外線功能。常規應該每周用酒精擦洗內部一次。具體的操作請參考培養箱的手冊，或著咨詢培養箱技術支持。使用消毒劑應小心，培養箱內有檢測溫度、濕度和二氧化碳濃度的感測器，腐蝕性消毒劑或有機溶劑有可能損壞某些器件，請慎用。另外，揮發性的甲醛有毒，易燃、易爆。如果在培養箱內殘留甲醛的話，細胞會死光光哦（我實驗室的真實故事）。總之，先看培養箱手冊，再聯系技術支持，方可萬無一失啊。

9. 常規最好什麼也不放！硫酸銅的作用是抑制細菌生長（但多數用在處理污染的孔板）。因為現在的孵箱都有抑菌功能。

10. 我們實驗室的做法:把平皿高壓滅菌後,在無菌操作台內加入適量的滅菌雙蒸水或者生理鹽水.再加少量新潔爾滅,濃度沒關系.細胞養的都可以.

3. 細胞培養污染的問題

「細胞間隙有 很多在動的小東西」可能是黑膠蟲，是血清里的。可以把血清放在培專養箱培養兩天，用屬400倍觀察下是否有會動的黑黑的（但不大像桿狀），如有則是黑膠蟲。如果有這種情況出現就要換血清了，據說最好的是北美血清但比較貴，澳洲血清也不錯的，但是我們這邊實驗室也有用澳洲血清也有少量黑膠蟲出現，也沒辦法。
培養基應該不大容易出問題的，雙抗一般都是用青鏈的，當然也有可能你的細胞原本就有污染的。支原體污染用顯微鏡是看不出來的。

4. 細胞培養pbs容易污染，如何

血清，無血清培養基，PBS污染怎麼能看出來
1.可避免血清批次間的質量變動，提高細胞培養和實驗結果的重復性。
2.避免血清對細胞的毒性作用和血清源性污染。
3.避免血清組分對實驗研究的影響。
4.有利於體外培養細胞的分化。
5.可提高產品的表達水平並使細胞產品易於純化。
缺點：
1.細胞在無血清培養基中易受某些機械因素和化學因素的影響，培養基的保存和應用不如傳統的合成培養基方便。
2.成本較高。
3.針對性很強，一種無血清培養基僅適合某一類細胞的培養。

5. 困惑：細胞及培養基是被細菌污染了嗎

細胞培養中常見的污染情況總結如下:
1、細菌：細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀，根據感染細菌的不同，可有不同的外形，培養液一般會渾濁變黃，對細胞生長影響明顯。仔細檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時放氣時間足夠，壓力足夠！尤其是和儲存培養液接觸的移液管等物品，連續兩次污染的話有可能造成儲存液污染，一定要注意！下次使用前檢查一下培養液是否存在渾濁的現象！可在培養液中加相應的抗生素處理
2、黴菌：培養液是清亮的，倒置顯微鏡下無雜質，37度孵箱培養2-3天，仍清亮，但出現絮狀雜質，鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物，可看到明顯的菌絲，細胞仍可生長，但時間長之後，細胞的活力狀態變差，用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內，再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅。或者在培養箱的托盤加入飽和的消毒磷酸氫二鈉高鹽液體,可以防止黴菌污染。 CO2孵箱被黴菌污染後，可把所有細胞暫時轉移，採用過氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。並把過氧乙酸放置在孵箱內一個小時，使其蒸汽彌漫。待過氧乙酸的氣味消散後，再移入細胞。孵箱應定期清潔（2月左右），尤其在多雨的季節。 其它培養箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外燈照。
預防黴菌污染，可在培養基里加3u/ml的兩性黴素或制黴菌素或放線菌素D或雙抗；但細胞一旦污染，很難挽救，制黴菌素或放線菌素D或雙抗都於事無補，建議舍棄該污染細胞。，將環境徹底消毒，如果所有細胞都污染，可能是系統污染，檢查一下培養基和器材，如果只是個別污染，可能是操作問題，就要注意操作
3、支原體：黑色的，好象多為多形，培養液一般培養液一般會渾濁，原體感染，國內血清很多都沒有做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中最常見的微生物之一。而且它不能用過濾的用泰樂菌素，獸用支原體病的葯，但可用於細胞培養，無任何不良反應。
4、黑蛟蟲：可以穿透濾膜，也可以通過空氣傳播，低倍下為黑色點狀，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去，培養液也是不渾的，一般不會太影響，細胞還是可以用的。常常是細胞生長狀態良好，且觀測到的運動物無明顯增多，且培養液顏色、透明度無明顯變化，可在同一批號的血清養的細胞中發現類似現象。對細胞生長狀態不會有明顯影響，在細胞增殖旺盛之後會自然消失，除更換血清外無須特殊處理。建議如果細胞有可能是此種污染的話，可以增加細胞的種板密度，以提高細胞的生存率。
5、真菌：一般培養液清亮，不變色，鏡下有絲狀物，有些真菌開始很像死細胞碎片，只是它很多很多的小塊很清楚，象珊瑚狀，不象細胞碎片分不清，慢慢的會長出很細的黑色絲狀物。
真菌生長的比較慢，不象細菌那麼容易被發現，但是一旦發現有它的存在細胞就被污染了，也很難救活了。
6、原蟲：培養液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細小的點狀物數量非常多，輕微活動，細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢，而且細胞狀態不好，邊緣不清楚，細胞不透亮。他們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養。這種共生是非常普遍的，但他們的數量小，細胞站優勢所以不會影響到細胞的正常生長，只有當他們到達一定的數量時就會影響到細胞的生長，最終形成惡性循環。
污染的可能原因：可能原因很多比如配液消毒問題、操作問題、環境問題等等

關於培養基的無菌狀況，取培養基至培養瓶中（不加細胞），37度試培養一段時間後觀察。如果沒有細菌生長 就是操作的問題。
也可以在培養基中事先加入雙抗（硫酸鏈黴素和氨苄青黴素）。但雙抗有時會影響細胞的狀
態，所以在做轉染、檢測細胞某項指標前一定要撤去雙抗，以避免影響實驗結果。
1、孵箱應定期用三氧機消毒 或者 紫外光照射，並用酒精和新潔爾滅試擦孵箱同時孵箱內的水應是三蒸水
2、超凈台\取材\器材\培養液\培養瓶\操作等因素
3、超凈台的風機不能過大，風機到6-8格。否則也可能能致黴菌污染
4、無菌室經甲醛熏蒸消毒後，可用同等量的氨水噴灑中和，約幾小時即可進入操作。

6. 細胞培養中如何減少污染

污染是細胞培養技術中面臨的主要問題。某些污染的發生往往難以察覺檢測，而且污染源能長期共存於培養體系中，這類染事實上大部分被人們忽視了。

培養的細胞作為個生物體，會對培養環境以及環境中的污染物作相應的反應，造成培養細胞生物學特性的改變，而實驗結果造成潛在的威脅，而且隨著污染時間的長而增加。

培養環境中的物理、化學及生物因素都可能入培養環境造成污染。由於入侵的微生物在培養系中不斷增殖、代謝，因此生物性的污染對細胞的害最大。隨著污染微生物的不斷增殖，交叉污染可能性也不斷增加。此外，微生物代謝消耗大量需的養分，同時產生多種有毒的代謝產物，如酶、抗原及毒素等，進一步對細胞產生毒害作用。因此，識細胞培養污染的途徑及其危害性，建立細胞培規范的操作方法及規章制度，可以有效地防止污染保證實驗體系的穩定性和可靠性。

1、細胞培養基本技術

為了減少污染對細胞培養的影響，必須建立細胞凍存庫。細胞凍存庫應該分主細胞庫（Master cell bank，MCB）和工作細胞庫（Working cell bank，WCB），當需要做實驗時從主細胞庫中復甦細胞建立工作細胞庫。每一個凍存標本都應明確記錄細胞的性質、代數及有無污染。同時還應建立規范的檢測程序進行菌檢及細胞鑒定。

為了保證培養細胞系的完整性，必須進行詳細的實驗記錄，應包括以下內容:細胞系的種類及來源、有無污染（如細菌，病毒，支原體）、細胞代數和倍增時間、以及選擇性突變。詳細的記錄有利於對細胞的遺傳及生理特性在常規傳代培養中因突變、污染及各種原因導致的改變進行分析。經過連續傳代培養的細胞與它較早代數的凍存細胞相比，隨著培養時間的延長，細胞在適應環境的過程中，其生物特性已發生了改變。培養的細胞由若干生長速度及活力各異的亞群組成。隨著培養時間的延長生長速，度快及活力高的細胞亞群逐漸占優勢這種選擇性，趨勢會影響整個細胞群的生物特性。應用不同代數的細胞連續進行實驗則結果會發生偏差。建立細胞凍存庫就能避免這種影響通過復甦相同代數的細胞，人們就能在較為均一的條件下重復實驗。

細胞培養工作需要清潔，保持良好的環境及規范的操作程序。超凈工作台是細胞培養中普遍使用的無菌操作裝置，它需要合理的布置及經常性的維護。超凈工作台的工作原理是驅動經高效濾菌凈化後的空氣，通過工作檯面形成氣流屏障，從而阻止外界污染物的侵入並使操作過程中產生的飛沫限制在超凈工作台中。因為操作過程中可能產生有毒的物質，所以採用垂直氣流比水平氣流安全。
當進行移液，傾倒液體的操作過程會產生飛沫並沉積在超凈工作台內物體的表面。超凈工作台的氣流並不能阻止飛沫的產生，飛沫會隨著氣流的方向飄浮。超凈工作台不合理的放置、不恰當的維護以及不規范的使用會破壞超凈工作台氣流的方向導致飛沫更廣泛的沉積。酒精燈的火焰、操作者的活動、談話、咳嗽及打噴嚏都有可能影響氣流。飛沫的沉積是導致超凈工作台內物品污染的主要因素造成潛在污染的進一步傳播。因此為減少交叉污染的發生，應盡可能減少超凈工作台內的物品。不同細胞系以及同一個實驗室不同操作者所使用的培養試劑一定要分開使用，如胰酶、培養液等。否則，一個操作者的失誤可能引起所有細胞發生污染。

2、細胞培養的污染

細胞培養污染是指培養環境中侵入了對細胞生存有害的成分和造成細胞變異的異物。細胞培養污染可分為以下三類：物理性、化學性及生物性。為了使細胞培養的結果更可靠，應該固定所有培養條件，並保證其重復性。

2.1物理性污染的來源、危害及預防物理性污染常常被人們所忽視或被籠統地歸為化學性污染。物理性污染通過影響細胞培養體系中的生化成分，從而影響細胞的代謝。培養環境中的物理因素，如溫度、放射線、振動、輻射(紫外線或熒光)會對細胞產生影響。細胞、培養液或其它培養試劑暴露於放射線、輻射或過冷過熱的溫度中，可以引起細胞代謝發生改變，如細胞同步化、細胞生長受抑制甚至細胞死亡。通過實驗室的合理設計及建立規范的操作規程，可以減少環境中物理因素對細胞的影響。孵箱應放在溫度較恆定的環境中，周圍不能放置能引起機械振動的設備，如離心機。培養液及培養試劑應放在固定的位置，為避免光照試劑不能放在玻璃門的冰箱中，試劑周圍不能放同位素。培養液從冰箱中取出後應在室溫中放置一段時間後再進行實驗，以避免過冷的溫度對細胞的影響。

2.2化學性污染的來源、危害及預防 培養環境中許多化學物質都可以引起細胞的污染。化學物質並不總是抑制細胞的生長，某些化學物質如激素就可促進細胞的生長。不同細胞對化學物質污染的反應是不一樣的。未純化的物質、試劑、水、血清、生長輔助因子及儲存試劑的容器都可能成為化學性污染的來源。細胞培養的必需養分，如氨基酸，若濃度超過了合適的范圍，也會對細胞產生毒性。同樣，不同細胞系其最佳培養條件下對血清和緩沖液的要求是不一樣的，在培養中應嚴格控制。玻璃製品清洗過程中殘留的變性劑或肥皂（通常殘留在瓶蓋的內表面）是最常見的化學性污染。

2.2.1水水是唯一一種在凝固時膨脹的化合物。因此在選擇凍存細胞的容器時應考慮到這個因素。容器因水的膨脹而發生破裂是引起試劑污染的重要原因。為了避免金屬離子、有機分子、細胞內毒素等物質對水的污染，在配製液體，清洗容器時必須使用不含雜質的超純水。需要注意的是，超純水放置過久其純度會下降。

在高壓蒸氣滅菌及蒸餾水時水經常被污染，因為高壓蒸氣鍋及純水機的常規維護後可能有少量的化學物質殘留。為了保證水的純度，我們應採取措施盡量避免化學物質的殘留。

2.2.2血清動物血清是細胞培養中常用的天然培養基，但血清又是潛在的生物及化學污染的來源。由於血清採集於多個動物，而且不同廠商的生產工藝及質量各不相同，因此血清中許多成分的濃度存在很大的變異。血清對不同細胞的促生長能力及毒副作用取決於這些細胞的分化功能、組織來源及培養基的成分等因素。在進行一系列實驗時，為了保證實驗的可重復性，最好選用同一批次的血清。

2.2.3培養液、培養附加成分、試劑培養液、培養附加成分、試劑都可能成為化學性污染的來源。細胞培養使用的所有物質都應是高純度的，並經過權威機構的鑒定，實驗者本人也應對上述成分進行純度鑒定。同時，正確配置和儲存培養液及試劑也是非常重要的，應該採取標準的操作步驟，避免液體體積計算錯誤，混用類似化合物等錯誤。

2.2.4培養器皿及容器細胞培養過程中會使用到各種不同的培養器皿及容器。培養器皿的大小，構形設計可能會影響到培養中氣體交換、濕度、培養液的pH值和細胞生長密度。培養器皿的工藝及滅菌過程中的差異可能對培養體系產生影響。塑料製品在生產過程中可能殘留一些有毒成形劑，生產工藝的不同可能引起器皿表面附著能力的不同。儲存不同物質時應選用合適的塑料或玻璃容器，因為酒精、強酸、強鹼能夠溶解塑料或玻璃的某些成分。

2.3生物性污染的來源、危害及預防外界的微生物如昆蟲、節肢動物、原蟲、黴菌、病毒、細菌、無細胞壁的微生物(通常指支原體)和其它類型的細胞都可能侵入培養環境引起污染。只要在一個開放的環境中進行培養，都難以避免發生污染。發生污染的可能性取決於操作方法、培養室的無菌環境以及實驗室的規章制度。生物性污染對細胞代謝的影響，可因污染源和細胞的種類不同而表現各異。細菌、真菌或其它微生物污染的檢測可以用不同培養基進行檢查。支原體污染的檢測需要特殊的方法。病毒污染的檢測可以使用許多體內或體外實驗，包括大鼠或小鼠的接種、逆轉錄酶分析、凝血試驗、紅細胞吸附試驗等。

細菌和真菌的污染較易發現並及時清除，而大多數實驗室對支原體的污染缺乏足夠的認識。為了防止支原體及其它微生物污染的發生和傳播，必須建立規范的無菌操作程序及各種規章制度。支原體歸屬

於柔膜體綱（Mollicutes）的支原體目，它們都具有以下共性：無細胞壁、無細胞壁主要成分———粘肽的表達。支原體與其它細菌不同之處還在於其胞膜中含有膽固醇或其它甾醇，這種特性使支原體膜更具柔順性，對於物理因素，如壓力、滲透壓、脫水的抵抗力很3大。支原體直徑僅有013～018μm，並且變形能力大，故能通過濾菌器。需要指出的是，只要有一個具有增殖能力的支原體就能引起培養體系的污染。一旦細胞被污染，支原體的滴度隨著時間的延長而逐漸升高，最高可至每毫升10克隆。最為致命的是，即使存在很嚴重的支原體污染，細胞外觀可無明顯變化。如果繼續使用這種已被支原體污染，而貌似正常的細胞做實驗，將會嚴重影響實驗結果。

7. 細胞培養污染的問題

支原體
立克次氏體污染
它們屬於專性胞內寄生微生物
動物細胞培養最怕的就是這個
污染原因跟血清
種細胞
操作有關
你接入的細胞可能有它們寄生
換一下細胞試試

8. 細胞培養中出現黑點是污染嗎如何處理 已解決

一旦您在細胞培養的過程中發現有黑點生成，首先，要肉眼觀察培養基是否專混濁，然後，在鏡下觀屬察培養細胞生長的狀態，黑點是否游動。如果細胞被污染，微生物則會大量繁殖，培養基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。 如果在鏡下觀察細胞，生長狀態良好，與黑點出現前相比，沒有任何變化，那麼，黑點的出現可能與以下幾種情況有關： （1）細胞生長過老，破碎的細胞殘骸； （2）血清質量不好，反復凍融的結果； （3）配製培養基的pH值偏高，不宜細胞生長； （4）配製培養基的水質、容器不合格。可應用離心、過濾的方法去除這些黑點；

9. 細胞培養老是污染，怎麼解決的呀！！！

細胞培養最關鍵的還是操作，如果操作規范的話，污染幾率是很小的，如果在培養的時候總是有黑色點狀物質，可以考慮是不是細胞碎片或者血清里的蛋白質沉澱。

細胞污染可能原因：
1.天氣太熱，實驗者在培養和接種或者換液時出汗（有空調稍好，但是手也出汗）。
2.培養間里可能暗藏污染原。
3.注意培養箱（這點最重要），仔細檢查培養箱里的隔板的下面，有可能有黴菌斑。（我以前遇到過）
4.培養基污染多數是配置過程中造成的，仔細檢查配置過程用到的器具。
5.血清過期一個月，如果保存的好應該沒有問題，但是保存不好，新來的血清，用一次就可能污染。血清過期和污染是否有必然的聯系不好說，我們覺得聯系不大。

解決辦法：
1.徹底清潔培養間，顯微鏡室。然後，紫外燈多照射一端時間消毒空氣。
2.徹底清潔培養箱：（1）每個隔板仔細清洗，火烤。（2）培養箱大換水，換成新鮮干凈的蒸餾水。（3）培養箱內壁用酒精棉球或者稀過氧乙酸認真擦洗。（4）紫外燈長時間照射（一天）。
3.實驗用器械消毒：注意消毒時間和壓力，有必要檢查壓力鍋和校正壓力表是否准確。
4.一次性手套在打開使用前一天放入無菌間照射消毒。
5.如果用雙抗，應該現用現配。
6.注意過濾器的消毒滅菌。
7.經驗告訴我們過期1年內的血清，只要保存妥當，其實血清的效價是不會降低的；還有剛購買的大規格的血清收到後，避免反復凍融，血清分裝的時候要無菌分裝，轉入無菌間，在超凈台內將血清分裝入50-100ml血清瓶中封口，並於-20℃保存備用。分裝時注意：① 預先要將血清輕輕搖動數周、混勻；② 用吸液管吹出血清時要注意：③ 不要吹出氣泡，血清很粘稠，很容易產生氣泡。如果產生氣泡，則在酒精燈火焰上過一下。
8.檢查培養間和超凈台的通風過濾網，如果臟了，需要更換。

10. 細胞培養，被污染

細胞污染？ 細胞產品專家齊氏生物建議您先搞清楚污染的原因
1）細菌（會出現培養液變混濁，pH改變，污染後細胞發生病理改變，胞內顆粒增多、增粗，最後變圓脫落死亡，造成試驗失敗和細胞株丟失。）

2）真菌（可見培養液中漂浮著白色或淺黃色的小點，有的散在生長，培養液一般不發生混濁；倒置顯微鏡下可見絲狀、管狀或樹枝狀的菌絲縱橫交錯在細胞之間或培養基中，有的呈鏈狀排列。）

3）支原體（部分敏感細胞可見細胞生長增殖變慢，部分細胞變圓，從瓶壁脫落。但多數細胞污染後無明顯變化，或略有變化，若不及時處理，還會產生交叉污染。 ）

可以從組織清洗、實驗室環境滅菌、無菌操作規范等幾個方向查找一下原因。