pcr污染

『壹』 PCR實驗室污染了怎麼處理

出現污染後，我們首先考慮可能是試劑的污染，更換新批號的HBV試劑重新檢測後，結果仍為全部標本陽性。
將HBV標本拿到其他正規的PCR實驗室檢測，結果標本中陰、陽性結果都有，陰性對照是陰性，陽性對照是陽性，說明標本沒有被污染將兩種批號的HBV試劑拿到其他正規的PCR實驗室檢測，也顯示試劑沒有問題。
我實驗室用消毒液擦拭工作檯面後，打開所有的紫外燈照射一天，將所使用微量進樣器、離心管、槍頭、手套、記號筆、記錄本等都更換掉，再將HBV標本進行檢測，結果全部標本仍然為陽性。
用消毒液擦拭工作檯面後，打開所有的紫外燈照射一天，將HBV標本重新檢測，同時設置了兩個陰性對照(A和B)，A 陰性對照為將試劑的反應管從試劑盒中拿，打開反應管的蓋子，在空氣中暴露10 min，蓋上蓋子，上機檢測；B陰性對照為將試劑的反應管從試劑盒中拿，不開蓋子，直接上機檢測。結果是全部標本和A陰性對照為陽性，而B陰性對照為陰性。
至此，雖然還查找不到污染源是什麼，但有一點可以肯定，PCR實驗室污染是氣溶膠擴散而引起的後來經過調查，發現污染是由於本室工一位工作人員在打掃實驗室衛生時，用擴增區的掃笤和拖把打掃了標本制備區的衛生引起。

在確定了污染的原因後，我們就開始著手排除污染，每天都打開整個PCR 實驗室的門窗和排氣扇，讓整個實驗室通風，用消毒液擦拭整個PCR實驗室，打開所有的紫外燈照射。
每隔3 d按3．5步驟檢測一次，一直這樣處理了一個月，A陰性對照才轉為陰性。連續檢測三次A和B陰性對照，每次結果都均為陰性，才確定PCR實驗室恢復正常。

通常我們對PCR實驗室污染的預防是採取隔離不同操作區、分裝試劑、改進實驗操作等規則，對污染的處理是用稀鹽酸擦拭或浸泡；紫外線照射法等 ]。而對於實驗室的通風方面沒有給予足夠的重視，為了防止實驗區間之間的相互污染，各個實驗區間都是盡可能的密閉，從而使得實驗室出現PCR產物殘留污染的幾率增大。從本次PCR實驗室污染排除的過程來看．我覺得污染得以排除的一個關鍵是通風。適當的給予實驗室通風，可起到空氣稀釋的作用，有利於PCR產物殘留量的減少，加快實驗室污染的排除。

『貳』 PCR實驗過程中易發生污染的原因有哪些

產生污染主要有以下4個原因：

①是PCR擴增產物的污染。這也是最常見的污染原因。PCR產物經反復多次的擴增，其復制量遠遠超過PCR的檢測極限，所以即使是極微量的污染也足以造成實驗結果假陽性。

②試劑的污染。在試劑的配製過程中，接觸了污染的容器、移液器、槍頭、溶液等物導致試劑被污染。

③待測樣品被污染。放置樣品的容器被污染或由於容器密封不嚴導致樣品與外界接觸被污染;其次在核酸提取過程中使用了被污染的移液器或槍頭導致樣品被污染;另外，某些樣品中含有病毒，若彌散到空氣中則有可能形成交叉污染。

④氣溶膠污染。若氣溶膠中包含病毒等污染物擴散至空氣中極有可能造成PCR產物污染。氣溶膠是由空氣與液體表面摩擦而產生的，開蓋、晃動反應管及污染加樣器的反復吸樣都可形成氣溶膠從而導致交叉污染。據計算一個氣溶膠顆粒可含48 000 拷貝，因此，應尤其重視由氣溶膠導致污染的問題。PCR 實驗室只要出現了污染，之前的結果報告就變為無效而且也無法進行其他的實驗操作。必須找出並徹底清除污染源，才能得到准確有效的實驗結果。

『叄』 PCR的主要污染物

DNA分子氣溶膠，對PCR影響最大，直接導致非特異性的擴增產物，需要定期對實驗室做紫外線照射。另外空氣中粉塵也會影響，但是現在都是使用超凈工作台，這個問題可以避免。

『肆』 怎麼防止PCR實驗室污染

PCR實驗室污染

標本間交叉污染：標本污染主要有收集標本的容器被污染，或標本放置時，由於密封不嚴溢於容器外，或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染；標本核酸模板在提取過程中，由於吸樣槍污染導致標本間污染;有些微生物標本尤其是病毒可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴散，導致彼此間的污染。

PCR試劑的污染：主要是由於在PCR試劑配製過程中，由於加樣槍、容器、雙蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。

PCR擴增產物污染：這是PCR反應中最主要最常見的污染問題。因為PCR產物拷貝量大，遠遠高於PCR檢測數個拷貝的極限，所以極微量的PCR產物污染，就可造成假陽就可形成假陽性。

還有一種容易忽視，最可能造成PCR產物污染的形式是氣溶膠污染；在空氣與液體面摩擦時就可形成氣溶膠，在操作時比較劇烈地搖動反應管，開蓋時、吸樣時及污染進樣槍的反復吸樣都可形成氣溶膠而污染。

實驗室中克隆質粒的污染：在分子生物學實驗室及某些用克隆質粒做陽性對照的檢驗室，這個問題也比較常見，因為克隆質粒在單位容積內含量相當高，另外在純化過程中需用較多的用具及試劑，而且在活細胞內的質粒，由於活細胞的生長繁殖的簡便性及具有很強的生命力，其污染可能性也很大。

污染監測

一個好的實驗室，要時刻注意污染的監測，考慮有無污染是什麼原因造成的污染，以便採取措施，防止和消除污染。

對照試驗

1、陽性對照：在建立PCR反應實驗室及一般的檢驗單位都應設有PCR陽性對照，它是PCR 反應是否成功、產物條帶位置及大小是否合乎理論要求的一個重要的參考標志。

2、陰性對照：每次PCR實驗務必做陰性對照。它包括①標本對照：被檢的標本是血清就用鑒定後的正常血清作對照；被檢的標本是組織細胞就用相應的組織細胞作對照。②試劑對照：在PCR試劑中不加模板DNA或RNA，進行PCR擴增，以監測試劑是否污染。

3、重復性試驗

4、選擇不同區域的引物進行PCR擴增

防止污染的方法

進行PCR操作時，操作人員應該嚴格遵守一些操作規程，最大程度地降低可能出現的PCR污染或杜絕污染的出現。

劃分操作區：目前，普通PCR尚不能做到單人單管，實現完全閉管操作，但無論是否能夠達到單人單管，均要求實驗操作在三個不同的區域內進行，PCR的前處理和後處理要在不同的隔離區內進行：
1. 試劑准備區。
2．標本制備區。
3. PCR擴增區及分析區。

切記：任何一間的產物及器材不要拿到其他兩個工作區。

分裝試劑：PCR擴增所需要的試劑均應在生物安全櫃、裝有紫外燈的超凈工作台或負壓工作台配製和分裝。所有的加樣器和吸頭需固定放於其中，不能用來吸取擴增後的DNA和其他來源的DNA：
1．PCR用水應為高壓的雙蒸水；
2．引物和dNTP用高壓的雙蒸水在無PCR擴增產物區配製；
3．引物和dNTP應分裝儲存，分裝時應標明時間，以備發生污染時查找原因。

實驗操作注意事項

盡管擴增序列的殘留污染大部分是假陽性反應的原因，樣品間的交叉污染也是原因之一。因此，不僅要在進行擴增反應是謹慎認真，在樣品的收集、抽提和擴增的所有環節都應該注意：
1. 戴一次性手套，若不小心濺上反應液，立即更換手套；
2. 使用一次性吸頭，嚴禁與PCR產物分析室的吸頭混用，吸頭不要長時間暴露於空氣中，避免氣溶膠的污染；
3. 避免反應液飛濺，打開反應管時為避免此種情況，開蓋前稍離心收集液體於管底。若不小心濺到手套或桌面上，應立刻更換手套並用稀酸擦拭桌面；
4. 操作多份樣品時，制備反應混合液，先將dNTP、緩沖液、引物和酶混合好，然後分裝，這樣即可以減少操作，避免污染，又可以增加反應的精確度；
5. 最後加入反應模板，加入後蓋緊反應管；
6. 操作時設立陰陽性對照和空白對照，即可驗證PCR反應的可靠性，又可以協助判斷擴增系統的可信性；
7. 盡可能用可替換或可高壓處理的加樣器，由於加樣器最容易受產物氣溶膠或標本DNA的污染，最好使用可替換或高壓處理的加樣器。如沒有這種特殊的加樣器，至少PCR操作過程中加樣器應該專用，不能交叉使用，尤其是PCR產物分析所用加樣器不能拿到其它兩個區；
8. 重復實驗，驗證結果，慎下結論

『伍』 PCR污染的原因是什麼

污染原因：
1）標本間交叉污染：標本污染主要有收集標本的容器被污染，或標本放置時，由於密封不嚴溢於容器外，或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染；標本核酸模板在提取過程中，由於吸樣槍污染導致標本間污染；有些微生物標本尤其是病毒可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴散，導致彼此間的污染。
2） PCR試劑的污染：主要是由於在PCR試劑配製過程中，由於加樣槍、容器、雙蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。
3.）PCR擴增產物污染：這是PCR反應中最主要最常見的污染問題。因為PCR產物拷貝量大(一般為1013 拷貝/ml)，遠遠高於PCR 檢測數個拷貝的極限，所以極微量的PCR產物污染，就可造成假陽就可形成假陽性。
4）容易忽視，最可能造成PCR產物污染的形式是氣溶膠污染；在空氣與液體面摩擦時就可形成氣溶膠，在操作時比較劇烈地搖動反應管，開蓋時、吸樣時及污染進樣槍的反復吸樣都可形成氣溶膠而污染。據計算一個氣溶膠顆粒可含48000 拷貝，因而由其造成的污染是一個值得特別重視的問題。

『陸』 PCR 產物污染是怎麼回事

這個問題問得太含糊了 產物污染有很多 具體是P出雜帶、引物二聚體、蛋白污染還是別的什麼的？需要針對性提問

『柒』 pcr實驗室出現污染，怎麼清除

實驗室不是都有大型的通風設備，只能開啟通風設備，人員盡量不要進入。幾天後應該會緩解吧。暫時沒想到其他方法。

『捌』 如何預防PCR實驗室污染

進行分子檢測操作時，操作人員應該嚴格遵守一些操作規程，最大程度地降低可能出現的PCR污染或杜絕污染的出現。
1）實驗分區：實驗操作最好在三個不同的區域內進行，PCR的前處理和後處理要在不同的隔離區內進行：
各工作區要有一定的隔離，操作器材專用，要有一定的方向性。如：試劑准備
→標准制備→PCR擴增區及分析區。
切記：任何一間的產物及器材不要拿到其他兩個工作區。
2）分裝試劑：可把試劑反應液先分裝成20ul 的小管（PCR管，一次分裝不宜過多，以一周用完為宜），嚴格-20℃保存；用時把分裝好的小管拿出加入模板即可。PCR擴增所需要的試劑均應在生物安全櫃、裝有紫外燈的超凈工作台或負壓工作台配製和分裝。所有的加樣器和吸頭需固定放於其中，不能用來吸取擴增後的DNA和其他來源的DNA。
3）嚴格取樣。取樣需要按照取樣規程來，做到專物專用（如取樣袋、剪刀等），禁止一物用在多個樣品上。
4）清潔實驗環境，減少陽性殘留。每次使用完的檯面、超凈台或者生物安全櫃都需及時清理，酒精擦拭、紫外照射。有條件的話，實驗區要保持通風換氣。
5. 擴增產物處理。分子檢測的環境污染大部分都是擴增產物的氣溶膠污染；對於擴增產物要做到：1）盡量不開蓋；2）及時處理，丟棄時需放入密封袋中密封好再處理。
6. 實驗工具的定期清潔。實驗服、移液槍等都需定期清洗。
7. 勤換手套。樣品前處理完後，需換新的手套進行配液操作。
8. 嚴格按照說明書中的注意事項進行操作。
9. 注意通風換氣。每次實驗都要保證排氣扇或風扇的運行。

『玖』 PCR實驗室出現了污染該怎麼處理

換地方做實驗，原房間通風照紫外