支原體污染細胞的表現

⑴ 細胞被支原體污染了會有哪些表現呢

細胞形態改變，一般是有梭形變成圓形，不再貼壁生長，漂浮
從形態上觀察是最直觀的

⑵ 支原體污染的簡介

支原體是一種大小僅為0.2~0.3 um，無
細胞壁，可透過一般過濾膜（0.22-0.45 um）的原核生物，在細胞培養過程中，支原體感染發生率達到63%，因而細胞培養過程中被支原體污染是一個世界性的難題。當細胞（特別是傳代細胞）被支原體污染後，細胞內的DNA、RNA及蛋白表達發生改變，而細胞的生長率一般並未發生顯著的影響，因而細胞被支原體污染一般難以察覺。 一般根據支原體種類不同，採取不同的方法進行檢測。目前常用的檢測方法有：
1. 試劑盒檢測法：
目前已有專門做支原體檢測的試劑盒，可以用細胞滴片進行檢測。
2. 觀察細胞的形態和生長特徵：
支原體污染比較嚴重時可出現生長減慢，有的培養基pH明顯變酸，並出現細胞病變，以此可依次對支原體污染進行檢測，但有些情況下支原體污染引起的病變特徵與病毒感染相似，因此不能准確診斷。
3. 分離培養法：
大多數支原體可出現特有的典型菌落。因而可依次盡心檢測，該方法准確、可靠，但時間長，敏感性不夠高。
4. DNA結合熒光素染色法：
利用熒光染劑（bisbenzimide,Hoechst 33258）偵測支原體污染。熒光染料會結合到DNA之Adenosine-Thymidine (A-T) rich區域，因為支原體DNA中A-T含量佔多數（55～80%），所以可將其染色而偵測。被支原體污染之細胞經染色後，在細胞核外與細胞周圍可看到許多大小均一之熒光小點，即為支原體之DNA，證明有支原體之污染。
5. 電子顯微鏡和免疫電子顯微鏡法：電子顯微鏡或者免疫電鏡下對樣本進行觀察，此法較准確，但受條件限制，時間長，敏感性不高。
6. 間接免疫熒光法和免疫印跡：簡便、快速、特異性強。
組織細胞培養工作中，可以從以下幾方面來預防支原體的污染：
控制環境污染；嚴格實驗操作；細胞培養基和器材要保證無菌；在細胞培養基中加入適量的抗生素。
當細胞被支原體污染後若由於材料的特殊性必須保留可以採用一定的抗生素進行處理，對支原體最有抑制活性抗生素是四環素類、大環內酯類等。目前，市場上已有了新一代支原體抗生素M-Plasmocin，能有效的殺滅支原體，又不影響細胞本身的代謝，而且處理過的細胞不會重新感染支原體。另外，配合支原體檢測試劑盒可以幫助盡快發現支原體的污染。 1、支原體size 0.1~0.8 um，無細胞壁，可透過一般過濾膜（0.22-0.45 um）
2、支原體污染時，沒有明顯的肉眼或一般光學顯微鏡可觀察到的特徵變化
3、過去缺乏簡單、快速且可靠的檢測方式
4、細胞流通間缺乏品管，造成實驗室間的相互污染
5、研究或操作人員忽略污染問題
去除支原體污染
1、抗生素處理：BM-cyclin（Roche），MRA（mycoplasma removal agent，ICN），Ciprofloxcin（Bayer），Enrofloxacin（Bayer）
2、Nucleic acid metabolites：5-bromouracil，Hoechst 33258，bromodeoxyuridine
3、Anti-sera 設備方面：
1、使用已作支原體測試ok之細胞株
2、於另一隔離之區域操作未知是否有支原體污染之細胞
3、使用不添加抗生素的培養基培養細胞
檢測方面：定期以標準的支原體檢測方法檢測細胞、培養基、血清、ddH2O有否被支原體污染。
實驗操作人員之無菌觀念與無菌操作技術之要求 1、應如何避免細胞污染？
細胞污染的種類可分成細菌、酵母菌、黴菌、病毒和支原體。主要的污染原因為無菌操作技術不當、操作室環境不佳、污染之血清和污染之細胞等。嚴格之無菌操作技術、清潔的環境、與品質良好之細胞來源和培養基配製是減低污染之最好方法。
2、如果細胞發生微生物污染時，應如何處理？
直接滅菌後丟棄之。
3、支原體(mycoplasma) 污染的細胞，是否能以肉眼觀察出異狀？
不能。除極有經驗之專家外，大多數遭受支原體污染的細胞株，無法以其外觀分辨之。
4、支原體污染會對細胞培養有何影響？
支原體污染幾乎可影響所有細胞之生長參數，代謝及研究之任一數據。故進行實驗前，必須確認細胞為mycoplasma-free，實驗結果之數據方有意義。
5、偵測出細胞株有支原體污染時，該如何處理？
直接滅菌後丟棄，以避免污染其它細胞株。 直接培養法
原理：直接培養支原體於培養基中，觀察其生長及菌落生成。
特點：是目前最直接與靈敏之步驟，亦是用來評估其它偵測新步驟之標准步驟。
缺點：培養時間長，須3－5星期才能判斷。有些支原體不能在培養基培養出來(例如M. hyorhinis)。需同時培養支原體株作為正反應對照組，可能會造成污染。
材枓：dextrose、L-arginine HCl、Difco PPLO broth (Difco 0554-17-1) horse serum、15% yeast extract solution (autoclaved)、Bacto agar、無菌有蓋螺旋試管(autoclaved)、無菌培養皿﹙60x15mm﹚、L-玻棒、37℃培養箱、厭氧缸（厭氧缸長期培養易有污染，所以厭氧包應用無菌水，每次打開厭氧缸後，用70% ethanol擦拭內壁。）
培養基制備：
基本配方為Difco PPLO broth(60%), 馬血清(20%), 15% yeast extreat solution (10%), 10x stock solution (10%)。由於培養時間長，可加入penicillin(50u/ml)至10x stock solution或加入thallium acetate (1：2000)至培養基中以防止其它細菌污染。
· 10x stock solution (1 liter) ：稱取50 gdextrose，10 gL-arginine HCl，溶於1 liter蒸餾水中。以0.22μm無菌過濾膜過濾滅菌。分裝100 ml至瓶中，保存於-70℃。
· 液體培養基(1 liter) ：稱取21 g之Difco PPLO broth，0.02 gphenol red 於600ml蒸餾水中，加熱攪拌溶解之。滅菌121℃，15分鍾。待溫度降低至室溫後，於無菌操作台內加入200ml馬血清，100ml之15% yeast extract solution，及100ml解涷之10x stock solution，混合均勻後，分裝至已滅菌之有蓋螺旋試管中，10ml/管。保存於4℃，期限1個月。
· 固體培養基(1 liter )：稱取21 g之Difco PPLO broth，0.02 gphenol red，15gBacto agar於600ml蒸餾水中，加熱溶解之。滅菌121℃，15分鍾。放在50℃水中浴中，待溫度降低至50℃時，於無菌操作台內加入200ml馬血清，100ml之15% yeast extract solution 及100ml解凍之10x stock solution，混合均勻後，倒入60x50㎜之無菌培養皿中，5ml/培養皿。保存於4℃，期限1個月。
步驟：
· 取1 ml細胞培養液或0.2ml細胞懸浮液，接種於液體培養基中，置於37℃培養二周，觀察是否有混濁或是pH值改變之情形。培養一周及二周後，分別取0.1 ml液體培養液塗在agar plate上，將其倒放置於37℃厭氧箱培養，培養至少3星期，持續觀察是否有支原體之菌落出現。
· 另取1 ml細胞培養液或0.2ml細胞懸浮液，塗抹在agar plate上，37℃厭氧培養3星期，持續觀察是否支原體菌落出現。
· 另作正負反應對照組，正反應對照組為Acholeplasma laidlawii (ATCC 23206) 與M. arginini (ATCC 23838)。負反應對照組為待測細胞之新鮮培養基。

⑶ 細胞培養出問題了，是支原體污染嗎

細胞培養出問題了，是支原體污染
支原體污染細胞後,特別是重要的細胞株,有必要清除支原體,常用方法有：抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補體聯合處理.要注意的是：支原體沒有細胞壁,故作用於細胞壁生物合成的抗生素,如內醯胺類、萬古黴素等是不敏感的；對多粘菌素、利福平、磺胺葯物普遍耐火葯.對支原體最有抑制活性抗生素是四環素類、大環內酯類等,氨基糖苷類、氯黴素對支原體有較小的抑製作用.必要時更換所有培養用物.通常,濾過除菌的方法對支原體是沒有作用的

⑷ 養細胞時細菌或支原體污染怎麼處理

我認為還是細菌或支原體污染，支原體的可能性更大。我養的是幹細胞，也專看到過這種情況屬，但是如果分化成成熟細胞，爬片了之後，細胞生長良好。有的時候支原體可通過0。22微米的濾膜，所以，根除支原體污染比較困難。只能是嚴格遵守無菌操作，希望沒事。 我自己的經驗（慚愧，污染過好幾次）－細胞污染的觀察（400倍） 可看到明顯的串珠狀物或圓形物——黴菌，如白色念珠菌 仔細觀察才能看到很多游動的細絲狀物，液體混濁，嚴重的還可以看到 一堆枯草一樣的東西——陰性桿菌，如枯草桿菌 細胞沒死亡，但生長很緩慢，液體也很清，仔細觀察，細胞表面好像有一層東西 ——支原體污染

⑸ 怎麼知道細胞有沒有被污染

細胞污染很多種，不同種細胞污染表現不同，可能檢測方法不同。不過大部分污染用內肉眼加鏡檢就可容以解決。
細胞污染一般分細菌污染，真菌污染，支原體污染，黑膠蟲等。
細菌污染：pH升高培養基變黃，培養基嚴重渾濁，鏡下可見細菌游動；
真菌污染：培養液短期內多不渾濁，有肉眼可見漂浮物，鏡下細胞間有菌絲體，生長變慢，時間長細胞死亡；
支原體污染：細胞生長一般無可見變化，可用支原體檢測試劑盒檢測支原體污染（現在市場上有賣，有檢測支原體DNA的，靈敏度高但過程復雜；非檢測DNA的過程簡單）
黑膠蟲：培養液不渾濁，細胞生長影響不大，鏡下有小黑點做布朗運動；

⑹ 支原體污染 細胞可以做轉染嗎

人型支原體（M、解脲支原體和生殖器支原體主要泌尿生殖道感染.genitalium）及發酵支原體（M.homins）。 支原體感染 、動物。成人主要通過性接觸傳播、造成的危害相當大.fermentans），炎症吸收較慢、分布廣泛，可達2～3周、桿形、絲狀?從人體分離的16種支原體中，合並症亦少，5種對人有致病性.3-0，但絕大多數預後都是良好的?，新生兒則由母親生殖道分娩時感染，革蘭染色為陰性，大小一般在0，呈高度多形性。支原體可在雞胚絨毛尿囊膜上或細胞培養中生長，人型支原體?，女性感染部位在宮頸?致病支原體中，營養要求比細菌高，僅少部分引起不同程度的疾病、植物及昆蟲等多個領域。支原體的種類繁多：絲狀支原體絲狀亞種?，有球形?從動物體內分離並鑒定出了幾十種支原體，肺部病變較重，引起植物和昆蟲病害的支原體有植原體和螺原體兩大類、豬肺炎支原體和絲狀支原體山羊亞種，可有小流行。支原體肺炎又稱原發性非典型肺炎，用姬姆薩染色很淺，支原體肺炎主要通過飛沫傳播、分枝狀等多種形態，即肺炎支原體（M、生殖支原體（M。它不同於細胞。 。成人男性的感染部位在尿道粘膜、解脲支原體（Ureaplasma urealyticum）、雞毒支原體.5um之間。支原體用普通染色法不易著色，潛伏期較長，涉及人，能造成嚴重危害的有四種，支原體肺炎全年均可發病，以冬季多見，給人類健康和科研工作帶來不利影響。生殖器支原體感染是近年新明確的一種性接觸傳播疾病主要傳播途徑是性 支原體是一類缺乏細胞壁的原核細胞型微生物，也不同於病毒。支原體肺炎雖然病程較長，即。支原體廣泛分布於植物與昆蟲中。新生兒主要引起結膜炎和肺炎，肺炎支原體起肺炎。支原體腦炎是學齡前兒童及青年人常見的一種肺炎。 .pneumoniae）

⑺ 細胞支原體污染，怎麼救

細胞支原體污染，怎麼救
我認為還是細菌或支原體污染,支原體的可能性更大.我養的是幹細胞,也看到過這種情況,但是如果分化成成熟細胞,爬片了之後,細胞生長良好.有的時候支原體可通過0.22微米的濾膜,所以,根除支原體污染比較困難.只能是嚴格遵守無菌操作,希望沒事.
我自己的經驗（慚愧,污染過好幾次）－細胞污染的觀察（400倍）
可看到明顯的串珠狀物或圓形物——黴菌,如白色念珠菌
仔細觀察才能看到很多游動的細絲狀物,液體混濁,嚴重的還可以看到
一堆枯草一樣的東西——陰性桿菌,如枯草桿菌
細胞沒死亡,但生長很緩慢,液體也很清,仔細觀察,細胞表面好像有一層東西
——支原體污染

⑻ 細胞發生支原體污染會對實驗有影響嗎

支原體污染幾乎可影響所有細胞之生長參數，代謝及研究之任一數據。
應如何避免細胞污染？
細胞污染的種類可分成細菌、酵母菌、黴菌、病毒和支原體。 主要的污染原因為無菌操作技術不當、操作室環境不佳、污染之血清和污染之細胞等。 嚴格之無菌操作技術、清潔的環境、與品質良好之細胞來源和培養基配製是減低污染之最好方法