降低雜菌污染
❶ 在酒精燈火焰旁操作為什麼會減少雜菌污染
超凈來台內的凈化空氣是從上面往下吹源，酒精燈它的熱量可以形成對流，可以在局部形成無菌區預防微生物感染。其次，酒精燈的消毒作用也是不能忽視的：做實驗時將培養瓶內的培養液或其它液體倒掉時，瓶口難免會有一些細胞，可以在酒精燈外焰上過幾下，產生的高溫可以消滅細胞，避免細胞交叉污染；裝培養液和各種液體的瓶子口受污染的幾率也是很大的，在火焰上消一下毒也能預防污染。
❷ 菌種污染原因何在怎樣避免
在菌種生產過程中，常會發生雜菌污染。因此，必須高度重視，嚴格無菌操作，注意每個環節堵絕雜菌污染源，使菌種成品率提高。
（1）污染原因
①培養基污染。培養基的各種原料，本身不同程度地混有雜菌或雜菌孢子。如果消毒滅菌不徹底，培養5天左右，在培養基表面和內部就會同時發生雜菌。
②菌種本身污染。一級種、二級種本身不純，污染上雜菌，突出表現在接入的菌種塊周圍培養基上。混有雜菌的菌種，會導致逐級擴大成批污染。
③操作污染。在一級種和二級種確認無污染的情況下，且培養基滅菌徹底，發現被轉接的培養基表面（包括種塊周圍）出現雜菌污染時，說明是由操作帶來污染。
④環境污染。培養室濕度高，消毒不徹底，或者菌種瓶棉塞潮濕等，這種污染表現在培養料表面或料內，雜菌多樣性，隨時間的推移污染越來越嚴重。
（2）防止污染措施
①講究配料。製作原種、栽培種的培養料，其原料要新鮮；難吸水的培養料，應先用足夠的水預濕充分，拌勻，及時裝瓶上鍋滅菌，擱置時間不宜超過5小時。
②細心裝料。選用合適的菌瓶。培養料裝料按不同級別菌種要求的裝料量達標時，抹凈瓶口，然後加棉塞，以免水分和培養料把棉塞玷污。製作母種注入培養基時要細心，切勿將培養基沾在試管口上。管口棉塞要松緊適中，過松易侵入雜菌。
③滅菌徹底。滅菌時，試管豎放，料瓶排放要留空隙，棉塞不能互相擠壓。根據培養料和容器裝置，確定達標的滅菌蒸汽壓力（或溫度）及滅菌時間。滅菌操作過程注意排出鍋內冷空氣，滅菌達標後放氣速度要慢。
④無菌操作。滅菌後冷卻至不燙手時再搬動，可減少瓶壁破裂。接種器具要保持潔凈，用前要消毒。接種時每個環節都要嚴格按照無菌操作規程進行，防止「病從口入」。
⑤精選良種。應選無污染，菌絲生長健壯的適齡一級種和二級種。根據不同級別的菌種質量標准，應在接種前認真檢查對照，若有懷疑寧棄勿用。
⑥凈化環境。接種室要通風乾燥，啟用前清掃、消毒。菌種培養期間，每天要適當通風，當空氣相對濕度大於70%時，要開吸濕機、空調機或用生石灰等降低室內濕度。
⑦定期檢查。接種後5天檢查1次是否有污染。污染雜菌的菌種，要及時揀出處理，並找出原因，加以防治。同時還要預防老鼠、蟑螂等帶入雜菌。
❸ 食用菌雜菌與侵染病毒有什麼區別食用菌制種與栽培中常見的雜菌有哪些敘述雜菌污染的原因，危害及措施
競爭性雜菌主要來是指與自食用菌爭 奪營養、空間和氧氣;改變培養料的p H或分泌毒素;污染菌種、培養料,導致爛料、菌絲萎縮、子實體變色、畸形、甚至腐爛等有害微生物(不包括病毒、線蟲)。競爭性雜菌主要是侵染培養料,不直 接侵染菌絲體及子實體,有間接破壞作用。多為腐生性雜菌,能通過多種渠道感染,從而導致菌種製作失敗和食用菌的產量下降。因此,在生產過程中,防止競爭性 雜菌污染極為重要。
❹ 容易雜菌污染怎麼辦
無菌空氣帶菌是發酵染菌的主要原因之一。
要杜絕無菌空氣帶菌，就必須從空氣的凈化工藝和設備的設計、過濾介質的選用和裝填、過濾介質的滅菌和管理等方面完善空氣凈化系統。
加強生產環境的衛生管理，減少生產環境中空氣的含菌量，正確選擇采氣口，如提高采氣口的位置或前置粗過濾器，加強空氣壓縮前的預處理，如提高空壓機進口空氣的潔凈度。
設計合理的空氣預處理工藝，盡可能減少生產環境中空氣帶油、水量，提高進入過濾器的空氣溫度，降低空氣的相對濕度，保持過濾介質的乾燥狀態，防止空氣冷卻器漏水，防止冷卻水進入空氣系統等。
設計和安裝合理的空氣過濾器，防止過濾器失效。選用除菌效率高的過濾介質，在過濾器滅菌時要防止過濾介質被沖翻而造成短路，避免過濾介質烤焦或著火，防止過濾介質的裝填不均而使空氣走短路，保證一定的介質充填密度。當突然停止進空氣時，要防止發酵液倒流人空氣過濾器，在操作過程中要防止空氣壓力的劇變和流速的急增。
❺ 如何預防香菇雜菌污染
防止雜菌來污染，要安排自適宜溫度栽培，香菇菌絲最適宜的生長溫度為22℃～25℃，子實體發育的最適宜溫度為15℃。菌齡以菌絲長滿瓶底5天左右為最佳。菌絲要求生長均勻、粗壯、絨毛多、色澤潔白、未扭結成原基、有鮮香味，千萬不能採用帶雜菌的菌種。培養基所用的木屑、麥麩子等都要新鮮、無霉變，培養料含水量50%～55%。選用的塑料袋不應厚薄不勻、質劣，否則會發生「脹筒」，為防治雜菌帶來不利。
滅菌必須徹底，從拌料到裝筒結束時間不超過4小時。在培養基中加入0.2%～0.3%的石灰，可防止培養基發酵變質。裝袋時要松緊適度，以防「脹筒」造成污染。在滅菌鍋內料袋垛疊不宜過緊，保持蒸汽暢通，避免滅菌死角。料袋裝鍋後5小時袋內溫度要達100℃，並維持3個小時，才能達到滅菌徹底。
在栽培時要避開高溫、高濕和多雨天氣，春、秋二季晴天上午接種最好，夏天可在清晨或夜晚接種。接種室要用酒精熏蒸滅菌，接種要快，可減少菌種在空氣中的暴露時間，以防雜菌污染。脫袋後還要防高溫高濕，當菌筒出現黃水時，要用噴霧器噴水清洗表面。采菇時要將菇腳采凈，否則會造成腐爛，滋生雜菌
❻ 菌種衰退的原因是什麼,如何區分衰退,飾變與雜菌污染
自發突變引起衰退；
衰退菌種菌絲生長凌亂，產生角變，子實體性狀改變，產量質量降低。
❼ 簡述培養基滅菌不徹底而導致雜菌污染的後果
滅菌不徹底的話培養基會長菌,不僅消耗了培養基,還會釋放很多專代謝產物,培養基就不能用了.
把滅菌屬後的培養基按滅菌鍋內的不同位置，每處抽取數管(瓶)，標上記號，置25℃～30℃培養一周左右進行檢查。如果培養基沒有什麼變化，說明滅菌效果良好；如果某一位置的培養基出現了雜菌菌落，可能是擺放的太緊，導致蒸汽不暢，或鍋的結構不合理等原因所致，應根據上述情況進行改進；如果大部分或全部菌種瓶都出現雜菌，說明滅菌溫度或滅菌時間不夠，應提高壓力或延長滅菌時間。經過幾次檢驗都證明能徹底滅菌後，以後按同樣條件滅菌的則不必進行檢查。
經過幾次檢驗都證明能徹底滅菌後,以後按同樣條件滅菌的則不必進行檢查。
❽ 單菌種的分離是消除污染雜菌的一種方法嗎
在自然界里,食用菌都不是單獨存在的,而是和許多細菌、放射菌、黴菌等生活在一起的.所謂菌種分離,就是把這些和食用菌一起生活的雜菌分離出來,通過培養,獲得純的優良菌種.菌種分母種、原種、栽培種. (一）母種的分離培養 食用菌母種的分離,可分為孢子分離法、組織分離法以及基內菌絲分離等. 1.孢子分離法 孢子分離法,是用食用菌的有性孢子或無性孢子萌發成菌絲,培養成菌種的方法.這種菌種生活力較強,但孢子個體之間有差異,且自然分化現象較嚴重,變異大,需經出菇試驗才能在生產上應用. （l）單孢分離法：是每次或每支試管只取一個擔孢子, 讓它萌發成菌絲體來獲得純菌種的方法.蘑菇和草菇用單孢分離得到的菌絲,有結實能力,可採用此法分離生產純菌種.單孢分離生產上較少採用,而且技術復雜,一般採用多孢分離法. （2）多孢分離法：就是把許多孢子接種在同一培養基上,讓它們萌發、自由交配來獲得食用菌純菌種的一種方法.具體操作方法,有以下幾種： ①種菇孢子彈射法：選擇個體健壯、朵形圓正,無病蟲害、出菇均勻、高產穩產,適應性強的八九分成熟的種菇,切去大部分,菌柄用無菌水沖洗數遍後再用已滅菌的紗布或脫脂棉、濾紙吸干表面水分.在接種箱或無菌室內,把種菇的菌褶朝下用鐵絲倒掛在玻璃漏斗下面,漏鬥倒蓋在培養皿上面；上端小孔用棉花塞住.培養皿放在一個鋪有紗布的搪瓷盤上,靜置12～20小時,菌褶上的孢子就會散落在培養皿內.形成一層粉末狀孢子印（平菇極淡紫色,蘑菇、草菇 為褐色,香菇、金針菇孢子印白色）.用接種針沾取少量孢子在試管中的瓊脂外面或培養皿上劃線接種.待孢子萌發,生成菌落時,選孢子萌發早、長勢好的菌落進行試管培養. 還可用孢子採集器收集孢子.方法是選好種菇後,按上述程序,輕輕掀開玻璃鍾罩,將種菇柄朝下插在孢子採收器的鋼絲架上,放在培養皿正中央.隨即蓋好玻璃罩,用紗布將鍾掌周圍塞好.並在紗布上倒少許升汞或無菌水.移入 20℃左右恆溫箱培養. ②褶上塗抹法：按無菌操作分離時；應選擇成熟的種菇,用接種針直接插入褶片之間,輕輕抹取褶片表面子實體尚未彈射的孢子,再在培養基上劃線接種. ③鉤懸法：取成熟菌蓋的幾片菌褶或一小塊耳片（黑木耳、毛木耳、白木耳〕,用無菌不銹鋼絲（或鐵絲、棉線等其他懸掛材料）懸掛於三角瓶內的培養基的上方,勿使接觸到培養基或四周瓶壁.置適宜溫度下培養、轉接即可. ④貼附法：按無菌操作將成熟的菌褶或耳片取一小塊, 用溶化的瓊脂培養基或阿拉伯膠、漿糊等貼附在配管斜面培養基正上方的試管壁上.經6～12小時的培養,待孢子落在斜面上,立即把孢子連同部分瓊脂培養基移植到新的試管中培養即可. 孢子分離得到的母種、必須進一步提純復壯,當母種定植一星期左右,菌絲布滿斜面時,選擇菌絲健壯、生長旺盛無老化、無感染雜茵的母種試管,進而轉管擴大,一般到栽培種,轉管不宜超過5次. 孢子分離得到的母種,必須通過出菇試驗,鑒定為優質菌種後,才可供生產使用. 一般菌類如蘑菇、平菇、鳳尾菇、香菇、冬菇和草菇等,都可用多孢分離法獲得母種. 現就銀耳孢子分離略述於下： 按無菌操作獲取種耳後,懸掛種耳的三角瓶經12小時培養後,瓶底培養基表面就有"孢子印".取出種耳,置 20℃—25℃溫箱培養2～3天,培養基表面會出現乳白色透明的糊狀小菌落,就是銀耳的酵母狀分生孢子形成的少量銀耳菌絲.此時移接入試管斜面培養基上,待長滿斜面後,再移接入營養豐富,且表面比較乾燥的培養基上.經30天左右,菌落長出白色菌絲. 銀耳的酵母狀分生孢子、菌絲只有與羽毛狀菌絲的子囊菌（香灰菌絲）混合培養時,由後者幫助分解木材及其他一些纖維物質,提供營養,才能利於銀耳孢子萌發,菌絲的定植和子實體的形成. 在兩種菌絲交會時,先選出兩種純菌絲. 羽毛狀菌絲要純化選育,一般要選取生長迅速,爬壁力強的試管斜面或種瓶,取先端菌絲,轉管移接,置25℃—28℃上培養,重復轉管幾次即可得到優良純種. 銀耳菌絲的特點,菌絲生長緩慢,擔孢子也不易萌發.在進行兩菌混合時,先取經8～IO天培養的銀耳菌絲斜面,按無菌操作方法在該斜面上距銀耳菌絲約0.5厘米處接入一 小塊羽毛狀菌絲.置25℃下培養1周即得到混合好的銀耳母種. 2．組織分離培養法 利用子實體內部組織,進行無性繁殖而獲得母種的簡便方法,即組織分離.該法操作簡便,菌絲生長發育快,品種特性易保存下來,特別是雜交育種後,優良菌株用組織分離法能使遺傳特性穩定下來.常採用以下分離方法. （l）子實體分離：種菇要選朵大蓋厚,柄短,八九分成熟的優良品種.切去菇兩基部,在無菌箱內以0.1％的升汞水浸幾分鍾,再用無菌水沖洗並揩乾或用75％酒精棉球擦拭菌蓋與菌柄2次,進行表面消毒.接種時,只要將種菇撕開,在萌蓋和菌柄交界處或菌褶處,挑取一小塊組織；移接 到PDA培養基上.置25℃左右溫度下培養3-5天,就可以看到組織上產生白色絨毛狀菌絲,轉管擴大即得到菌種.如香菇、平菇等可以用此方法. （2）菌核分離：茯苓、豬苓、雷丸等菌的子實體不易採集.而常見的是它貯藏營養的菌核.用菌核分離,同樣可以獲得菌種.方法是將菌核表面洗凈,用酒精或升汞消毒後,切開菌核,取中間組織一小塊,約黃豆大小,接種在PDA 培養基斜面上,保溫培養.應注意的是,菌核是貯藏器官,大部分是多糖類物質,只含有少量的菌絲,因此挑取的組織塊要大一些,如果組織塊過小,則不易分出菌種. （3）菌素分離：有一部分子實體不易找到,也沒有菌核,可以用菌素進行分離.如蜜環菌、假蜜環菌.其操作方法是先用酒精或升汞將菌素表面黑色皮層輕輕擦拭2～3次, 然後去掉黑色外皮層（菌鞘）,抽出白色菌髓部分；用無菌剪刀將菌髓剪一小段,接種在培養基上,保溫培養,即得該菌菌種. 菌素分離要注意：因菌素比較細小,分離素也比較細小,分離時極易污染雜菌,所以要嚴格操作. 3．基內菌絲分離培養法 利用食用菌生育的基質作為分離材料,來得到純菌種的一種方法,叫基內菌絲分離法. 此種分離方法是適宜只有在特定的季節才出現,而且是朝生暮死,不易採得的子實體.基內分離法與組織分離法不同之點是,乾燥的菇木或耳木中的菌絲常呈休眠狀態.接種後有時並不立刻恢復生長.因此,有必要保留較長的時間（約1個月）,以斷定菌絲是否能成活.基內菌絲分離法又可分為,材中菌絲分離（即菇木或耳木分離法）及土中菌絲分離法等. （1）材中菌絲分離法：就是菇木或耳木分離法,為了減少雜菌的感染,菇（耳）木在分離之前,必須進行無菌處理.可以把菇（耳）水表面用酒精燈火焰輕輕燒過,以燒死黴菌的孢子,或再用0.1％的升汞水浸孢幾分鍾,然後用無菌水沖洗後用無菌濾紙吸干.接種塊切取時應注意.接種塊必須在該菌菌絲分布的范圍內切取.所以,菌絲生長緩慢的種類應淺取；菌種生長快的種類可以深取.同時.還應根據菇菌的種類、木材質地、菇（耳）木粗細、發育時間的長短來確定菌絲分布的范圍.然後用一把利刀進行切取.接種塊應盡量小些,以減少雜菌感染機會,提離菌種的純度.接種塊移到培養基上,就應該放到適合菌絲生長的22℃～26℃ 的溫室或溫箱中培養,使菌絲恢復生長. （2）土中菌絲分離：食用菌種類很多,許多土生的食用菌；孢子不易萌發.組織分離也不易成功,用土中菌絲分離獲得純種的方法,叫土中菌絲分離. 土中菌絲分離時要注意,由於土中菌絲體的周圍生活著多種多樣的土壤微生物,因此分離時必須盡可能避開這些微生物的干擾,盡可能批取清潔菌絲素的尖端、不帶雜物的菌絲接種,反復用無菌水沖洗,在培養基中加入一些抑制細菌 生長的葯物,如 40微克／升的鏈黴素或金黴素.如發現感染細菌,可以把菌落邊緣的菌絲挑出來,接種到木屑培養基中.因細菌沒有分解木質素的能力,因此在木屑培養基中不易擴展；只局限於接種處.待菌絲長出感染區後,就可以再進行擴大提純了. （3）子實體基部分離：從瓶栽、袋栽或大床栽培的子實體基部分離出新菌絲的方法,叫子實體基部分離,現以袋栽銀耳為例說明： 從出耳早、出耳率離、無病蟲害的栽培室中；選擇生活力最強的幼耳5袋,移到氣候溫和,有散射光的野外場所進行後期培養,以增強菌絲體的生活力.經培養7～10天後,待子實體直徑達4～5厘米時便可取回,作為分離的母體.再從中篩選最理想的一朵,用利刀割掉銀耳子實體,放置於 0℃的冰箱或有敵敵畏的容器中過夜,以便殺死瓶中的害蟲.然後用75％酒精或升汞擦洗耳基和袋子外邊的雜質,連同接種工具、接種培養基等移進無菌室.經滅菌後,用接種刀把袋口上部約15毫米厚的老菌根挖除,並進行培養.待袋口露出白色菌絲時,用接種針挑取一塊半粒米大的白色菌結體,迅速移入母種試管培養基的中央,輕輕地脫去接種針, 塞上棉塞. 為了能夠獲得較多的母種,一次接種量要有100—200支試管,以便從中選擇.分離後應及時移入22℃—24℃恆溫箱或溫室中培養.由於培養基內水分較多,菌絲恢復要比耳木分離得快.經2-3天後,分離物的邊緣就可看 到白色菌絲.每天要至少觀察兩次,以便提純.觀察、提純方法與耳木分離法擔同.經適溫培養10-15天後,當接種塊扭結團出現紅、黃色水珠時,即可擴大原種. （二）原種和栽培種的接種培養 母種獲得以後,為了滿足菌種生產的需要.應選出優良、純度高的母種進一步擴大為原種. 原種培養基一般採用棉籽殼、木屑、草類等培養基. 瓶裝或袋裝的原種培養基滅菌後,可送入滅過菌的接種箱內,待瓶中的培養基冷至30℃以下,可按照無菌操作程序進行接種. 菌種瓶（袋）放入培養室時,要經常進行檢查,一經發現雜菌污染,立即取出.培養成的原種,菌絲體必須健壯有力,緊貼瓶壁而不幹縮,顏色純正,具有一定清香味,生活力強,擴製成栽培種時吃料快. 栽培種就是將原種進一步擴大培養成三級種,它和原種的接種及培養相同.一般香菇、平菇、冬菇、猴頭、木耳、銀耳的栽培種多用鋸木、棉皮作培養基.蘑菇多用糞草做培養料. 栽培種要求料塊不脫水干縮.菌絲體健壯有力、顏色純正,有清香味,無老化現象,無雜菌污染,有的種許可有少量原基,接入栽培料後,發菌快,長勢好,生活力強. 原種在接栽培種時,原種瓶口的一層菌絲體應挖去不用. （三）液體種的簡單培養 目前,用液體深層發酵法生產菌種,具有生產量大、周期短、菌齡整齊、成本低廉、接種方便等特點,是實現食用菌工廠化生產的目標.現將液體種培育過程簡述於後,供參考. 簡言之就是將純正優良的菌種,接入液體培養基（固體培養基不加凝固劑）,使菌絲繁殖形成大量小菌球,然後將這種培養基拌入木屑或棉籽皮料內,製成菌塊、培養其形成子實體.還可用於制原種、栽培種. 培養液體菌種,可將培養液裝入三角瓶中,約占空瓶的五分之一重量.用搖瓶機（也稱搖床）來培養.搖瓶機有旋轉式和往復式兩種,一般多用往復式.液體培養基可用馬鈴薯汁（加糖）,麥芽汁配製,也可用玉米粉、豆餅粉、糖、無機鹽等配製.可以混合培養基,因適用於多種食用菌和葯用菌的培養,均有好效果.組分：豆餅粉2％,玉米粉1％, 葡萄糖3％,酵母粉0.5％,磷酸二氫鉀0.1％,碳酸鈣 0.2％, pH自然, 12℃滅菌半小時.然後接種培養. 如果生產量較大,在三角瓶的基礎上,再逐級擴大種子缸,發酵罐中進行液體深層通氣發酵,產生大量菌種.但由於生產中要求設備繁多,技術性強,我們還應創造條件；實現食用菌栽培的現代化. （四）菌種質量的鑒定 菌種質量鑒定最好的方法是,做出菇試驗.但是時間比較長.在購置菌種時,或在菌種生產中,如何能知菌絲生長情況,快速判斷菌種質量?我們介紹幾種方法： 1.肉眼觀察：優良菌種菌絲濃白,絨狀,粗壯密集,生長整齊,速度快,香味濃厚. 2.優良菌種標准可歸納為："純、香、正、壯、潤"五個字.檢查時,打開瓶塞,從菌種瓶中部取出小塊菌絲體,觀察色澤,聞其氣味,手捏料塊檢查其含水量,看是否符合上述要求標准. 3.顯微鏡檢查：挑取少量菌絲,置顯微鏡上觀察其形態,菌絲分枝,分隔情況,鎖狀聯合,細胞膜的厚薄. 培養觀察：從菌種瓶中挑取小塊菌絲體,接種斜面試管培養基上,置23℃～25℃恆溫中培養,經五周後檢查菌種生活力.如果菌絲生長快,旺盛純一,健壯濃厚,長且整齊,則表示菌種的生活力強. 4.分塊法：在桌上放一張白紙,把菌齡相同的菌種從瓶內取出一大塊,用手分成2塊,再把2塊分成4塊,4塊 分成8塊,依次進行.優良菌種整塊多,碎渣少.劣次菌整塊少,碎渣多. 5.液體菌種鑒別：當三角瓶或發酵缸培養3-7天後,如液面出現氣泡,產生"油皮"、混濁等現象,說明菌種本 身帶有雜菌.如菌塊上浮,或遲遲長出很薄的菌絲層,則說明菌種生活力弱.白塊四周的菌絲生長快、濃白、棉絮狀,表明菌種生命力強. （五）菌種生產過程中的雜茵防治 在生產菌種時,要時刻注意雜菌污染,以防為主,一旦發生,根治很不容易.所以整個制種過程都必須在無菌條件下進行.接種箱及所有分離、接種的用具、器皿,都要進行嚴格的消毒滅菌.工作人員的雙手要用消毒劑清洗,並穿戴消過毒的工作服、帽和口罩,動作要敏捷、准確,盡量不要講話走動,以防空氣中的雜菌感染. 分離母種時,選擇出菇早、生活力強,第一潮菇是關鍵,因它生活力強,接種後迅速佔領陣地,無雜菌侵入的機會. 被污染的菌種,原因是多方面的,一般是滅菌不徹底所致,或因接種時無菌操作不嚴、瓶蓋不合適造成的.所以滅菌一定要徹底,最好在接種萌將培養基置25℃左右溫箱中做效果檢查,經2天不長雜菌,說明徹底,可以使用,接種過程中一定要嚴格無菌操作. 污染雜菌另一個原因可能是分離母種時感染雜菌,因種菇表面帶菌,消毒不徹底,通過組織塊將雜菌帶入培養基. 總之,污染機會很多,要注意環境消毒,按無菌操作規程徹底滅菌,層層把關,環環抓緊,嚴加註意；提離菌種質量.
❾ 食用菌菌種生產中污染雜菌的原因有哪些如何控制
在正常情況下，製作原種、栽培種或栽培袋的污染率在10%以下，各個環節和操作規范者，污染率只有1%～5%。如果超出這一范圍，則要及時查明原因，採取控制措施。
（1）滅菌不徹底
這一原因特點是導致的污染率高、發生早，出現污染的部位不規則——培養基上中下均可出現雜菌菌落。這類污染常在接種培養3～5天後發生。滅菌不徹底常與以下幾個因素有關：
①培養基原料的性質 不同原料導熱性不同、微生物基數不同，滅菌所需時間也不同。因此，滅菌時要根據培養基的性質不同來掌握滅菌時間。常用的培養基原料與滅菌時間長短的關系是：木屑＜草料＜木塞＜糞草＜穀粒（表2-1）。
表2-6 冷空氣排放程度與鍋內溫度、壓力的關系
常壓滅菌要注意，砌灶時鍋體與滅菌室的相對位置要合理，最好把灶內四角砌成圓形，以便灶內均衡升溫，同步滅菌，灶頂砌成圓拱形，利於冷凝水沿四壁下流而不打濕棉塞。鍋小、水少、火力不足，也常是滅菌不徹底的常見原因。
⑥滅菌容量和堆放方式 以蒸汽鍋爐送入蒸汽的高壓滅菌鍋，要注意鍋爐汽化量與鍋體容積相匹配，自帶蒸汽發生器的燃煤、燃油或電熱的高壓滅菌鍋，以每次容量200～500瓶（750毫升）為宜，常壓滅菌灶以每次容量不超過1000瓶（750毫升）為宜。容量增大，滅菌時間要適當延長。
鍋內被滅菌物品的堆放形式對滅菌效果影響顯著，特別是以塑料袋為容器時，這種影響更大。因為塑料袋受熱後變軟，如果裝料不緊，疊壓堆放，極易把升溫前留有的間隙充滿，不利於蒸汽的流通和升溫，影響滅菌效果。塑料袋擺放時，應以疊放3～4層為度，不可無限疊壓，鍋大時要使用擱板。有條件的最好使用鐵筐，裝筐滅菌。
（2）封蓋不嚴
這類污染出現在破損處。常出現在用罐頭瓶作容器、以聚丙烯薄膜作蓋的原種和栽培種中，用塑料袋作容器在折角處也時有發生。聚丙烯塑料經高溫滅菌後比較脆，在搬運過程中，緊貼瓶口處或有折角處極易磨破，形成肉眼不易看到的沙眼，雜菌孢子侵入而導致污染。
（3）設備設施簡陋引起滅菌後無菌狀態的改變
本來滅菌後的菌種瓶（袋）已達無菌狀態，但滅菌後的冷卻和接種環境達不到潔凈無菌，生產設備和生產環節分散，又往往忽略場地的大環境衛生，導致了污染。冷卻過程中，隨著料溫的降低，瓶（袋）內氣壓降低，雜菌孢子隨其內外氣壓的動態平衡向瓶（袋）內移動、定植。瓶袋外附有較多的灰塵（附著雜菌孢子），成為接種操作污染的污染源。
（4）接種物帶雜菌
這類污染的特點是雜菌菌落先從菌種塊上長出，雜菌的種類一致，通常成批量發生，且出現早，接種3～5天內就可肉眼鑒別。如一支被污染的母種會造成擴接後的4～6瓶原種全部污染；一瓶被污染的原種（有時肉眼難以發現）造成擴大後的30～50瓶栽培種的污染。這類污染要靠嚴格檢查菌種質量來克服，不但使用前要認真檢查，而且在培養全過程中要連續檢查和觀察，確保菌種純度。
（5）接種操作污染
這類污染一般發生在接種口處，較接種物帶菌和滅菌不徹底造成的污染發生晚，一般接種後7天左右出現。其污染主要是：接種室（箱）空氣消毒不徹底；菌種瓶（袋）冷卻時附在表面的雜菌；接種人員自身潔凈度不良；違反接種操作規程等。需注意以下技術環節：
①不使棉塞打濕 滅菌碼放時，棉塞切勿貼觸鍋壁；滅菌結束後要自然冷卻，不可強製冷卻；當冷卻至一定程度後微開鍋門，讓鍋內的余熱把棉塞上的水汽蒸發；滅菌時，可同時滅菌一些棉塞，留接種時換下打濕的棉塞。
②潔凈冷卻 滅菌後的菌種瓶（袋）不能直接放在有塵土的地面上冷卻。冷卻室使用前可用紫外線燈和噴霧相結合進行空氣消毒。
③嚴格消毒 接種室（箱）使用前須嚴格消毒；接種操作人員須在緩沖間穿戴專用衣帽（定期洗滌）；接種前要消毒雙手。
④科學操作 接種前做好一切准備工作，一次接種不間斷，一氣呵成；接種過程要少搬動、少說話，以減少空氣震動和流動；接菌室（箱）內絕對無菌的只有酒精燈火焰周圍很小的范圍，接種操作應盡量在這個小區內完成；拔棉塞時，不可用力直線上拔，而應旋轉式緩勁拔出，避免外界空氣突然進入而帶入雜菌；接種室（箱）每次的接種量不宜過大；接種時，接種工具一旦觸碰了非無菌物品，如種瓶外壁、操作檯面等，不要再用來取種，須重新火焰灼燒滅菌。
（6）培養環境不潔或高濕
這種類型接種後污染率較低，隨著培養時間的延長，污染率逐漸增高。通常大量發生在接種10天以後，甚至培養基表面已長滿菌絲後，才陸續出現污染。
（7）綜合控制措施
①從有信譽的科研、專業機構引進優良、可靠的原始種，做到來源清楚、性狀明確、種質優良，做好出菇試驗，做到使用一代、試驗一代、儲存一代。
②按照菌種生產各環節的要求，合理、科學地規劃和設計廠區布局，配置專業設施、設備，提高專業化、標准化、規范化生產水平。
③嚴格按照菌種生產的工藝技術流程進行選料、配料、分裝、滅菌、冷卻、接種、培養和質量檢測。
④嚴格挑選用於擴大生產的菌種，任何疑點都不可姑息，確保接種物的純度。
⑤提高從業人員技術素質，規范操作；生產場地要定期清潔、消毒，保持大環境的整潔狀態。
⑥專業菌種場要建立技術管理規章制度，確保技術的准確到位，保證生產。