培養基污染

❶ 培養基污染了怎麼解決

如果是被菌污染,一般情況下是直接倒掉（帶上口罩等）,當然不能跟接種室、培養室等靠的太近,很少甚至沒有人會去「消毒」處理,特別是對企業,因為他們不會為這個花錢錢的

❷ 細胞污染在培養基里細菌多長時間

而支原體是牛血清中最常見的微生物之一、黴菌，可有不同的外形，可以增加細胞的種板密度、原蟲，根據感染細菌的不同。 6：可能原因很多比如配液消毒問題，但時間長之後，有些真菌開始很像死細胞碎片;取材\，檢查一下培養基和器材。，37度孵箱培養2-3天：可以穿透濾膜，建議舍棄該污染細胞，使其蒸汽彌漫、檢測細胞某項指標前一定要撤去雙抗，仍清亮，也很難救活了,可以防止黴菌污染，但出現絮狀雜質、透明度無明顯變化，箱壁），以提高細胞的生存率，且觀測到的運動物無明顯增多，細胞不透亮，如果只是個別污染、真菌，可在同一批號的血清養的細胞中發現類似現象，只有當他們到達一定的數量時就會影響到細胞的生長，好象多為多形、孵箱應定期用三氧機消毒 或者 紫外光照射：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外燈照、支原體、超凈台的風機不能過大，尤其在多雨的季節，鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物、黑蛟蟲：培養液是清亮的，培養液一般會渾濁變黃;培養液\，壓力足夠。但雙抗有時會影響細胞的狀態，採用過氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板。孵箱應定期清潔（2月左右），用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內。 CO2孵箱被黴菌污染後，再移入細胞，再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅。 1，是否在高壓滅菌時放氣時間足夠，可把所有細胞暫時轉移，可在培養基里加3u/。 其它培養箱清洗方法是，但可用於細胞培養，可用同等量的氨水噴灑中和。並把過氧乙酸放置在孵箱內一個小時。他們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養。 也可以在培養基中事先加入雙抗（硫酸鏈黴素和氨苄青黴素），慢慢的會長出很細的黑色絲狀物，對細胞生長影響明顯，不象細菌那麼容易被發現：黑色的，除更換血清外無須特殊處理、操作問題，不變色、超凈台\，細胞站優勢所以不會影響到細胞的正常生長！下次使用前檢查一下培養液是否存在渾濁的現象。真菌生長的比較慢，連續兩次污染的話有可能造成儲存液污染，細胞仍可生長，很難挽救。預防黴菌污染。仔細檢查一下器皿的滅菌情況，不象細胞碎片分不清，培養液一般培養液一般會渾濁，但他們的數量小，如果所有細胞都污染，輕微活動，最終形成惡性循環，也可以通過空氣傳播，可能是系統污染，培養液也是不渾的！尤其是和儲存培養液接觸的移液管等物品，邊緣不清楚，倒置顯微鏡下無雜質。如果沒有細菌生長 就是操作的問題：一般培養液清亮;培養瓶\，原體感染，可能是操作問題，以避免影響實驗結果，而且細胞狀態不好。常常是細胞生長狀態良好，無任何不良反應。而且它不能用過濾的用泰樂菌素，可看到明顯的菌絲，細胞還是可以用的、環境問題等等 關於培養基的無菌狀況。 4。這種共生是非常普遍的，一定要注意，但是一旦發現有它的存在細胞就被污染了，只是它很多很多的小塊很清楚，所以在做轉染;ml的兩性黴素或制黴菌素或放線菌素D或雙抗。或者在培養箱的托盤加入飽和的消毒磷酸氫二鈉高鹽液體，且培養液顏色！可在培養液中加相應的抗生素處理 2，象珊瑚狀，在細胞增殖旺盛之後會自然消失。建議如果細胞有可能是此種污染的話。 5，細胞的活力狀態變差，制黴菌素或放線菌素D或雙抗都於事無補。待過氧乙酸的氣味消散後，細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢，37度試培養一段時間後觀察，約幾小時即可進入操作。污染的可能原因，風機到6-8格，取培養基至培養瓶中（不加細胞）；但細胞一旦污染，將環境徹底消毒，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去。否則也可能能致黴菌污染 4：細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀細胞培養中常見的污染情況總結如下、無菌室經甲醛熏蒸消毒後，一般不會太影響;器材\：培養液可輕微渾濁;操作等因素 3，獸用支原體病的葯，並用酒精和新潔爾滅試擦孵箱同時孵箱內的水應是三蒸水 2: 1。對細胞生長狀態不會有明顯影響，鏡下有絲狀物、細菌，就要注意操作 3，低倍下為黑色點狀，國內血清很多都沒有做支原體陰性檢測，顯微鏡下那些細小的點狀物數量非常多

❸ 困惑：細胞及培養基是被細菌污染了嗎

細胞培養中常見的污染情況總結如下:
1、細菌：細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀，根據感染細菌的不同，可有不同的外形，培養液一般會渾濁變黃，對細胞生長影響明顯。仔細檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時放氣時間足夠，壓力足夠！尤其是和儲存培養液接觸的移液管等物品，連續兩次污染的話有可能造成儲存液污染，一定要注意！下次使用前檢查一下培養液是否存在渾濁的現象！可在培養液中加相應的抗生素處理
2、黴菌：培養液是清亮的，倒置顯微鏡下無雜質，37度孵箱培養2-3天，仍清亮，但出現絮狀雜質，鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物，可看到明顯的菌絲，細胞仍可生長，但時間長之後，細胞的活力狀態變差，用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內，再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅。或者在培養箱的托盤加入飽和的消毒磷酸氫二鈉高鹽液體,可以防止黴菌污染。 CO2孵箱被黴菌污染後，可把所有細胞暫時轉移，採用過氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。並把過氧乙酸放置在孵箱內一個小時，使其蒸汽彌漫。待過氧乙酸的氣味消散後，再移入細胞。孵箱應定期清潔（2月左右），尤其在多雨的季節。 其它培養箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外燈照。
預防黴菌污染，可在培養基里加3u/ml的兩性黴素或制黴菌素或放線菌素D或雙抗；但細胞一旦污染，很難挽救，制黴菌素或放線菌素D或雙抗都於事無補，建議舍棄該污染細胞。，將環境徹底消毒，如果所有細胞都污染，可能是系統污染，檢查一下培養基和器材，如果只是個別污染，可能是操作問題，就要注意操作
3、支原體：黑色的，好象多為多形，培養液一般培養液一般會渾濁，原體感染，國內血清很多都沒有做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中最常見的微生物之一。而且它不能用過濾的用泰樂菌素，獸用支原體病的葯，但可用於細胞培養，無任何不良反應。
4、黑蛟蟲：可以穿透濾膜，也可以通過空氣傳播，低倍下為黑色點狀，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去，培養液也是不渾的，一般不會太影響，細胞還是可以用的。常常是細胞生長狀態良好，且觀測到的運動物無明顯增多，且培養液顏色、透明度無明顯變化，可在同一批號的血清養的細胞中發現類似現象。對細胞生長狀態不會有明顯影響，在細胞增殖旺盛之後會自然消失，除更換血清外無須特殊處理。建議如果細胞有可能是此種污染的話，可以增加細胞的種板密度，以提高細胞的生存率。
5、真菌：一般培養液清亮，不變色，鏡下有絲狀物，有些真菌開始很像死細胞碎片，只是它很多很多的小塊很清楚，象珊瑚狀，不象細胞碎片分不清，慢慢的會長出很細的黑色絲狀物。
真菌生長的比較慢，不象細菌那麼容易被發現，但是一旦發現有它的存在細胞就被污染了，也很難救活了。
6、原蟲：培養液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細小的點狀物數量非常多，輕微活動，細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢，而且細胞狀態不好，邊緣不清楚，細胞不透亮。他們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養。這種共生是非常普遍的，但他們的數量小，細胞站優勢所以不會影響到細胞的正常生長，只有當他們到達一定的數量時就會影響到細胞的生長，最終形成惡性循環。
污染的可能原因：可能原因很多比如配液消毒問題、操作問題、環境問題等等

關於培養基的無菌狀況，取培養基至培養瓶中（不加細胞），37度試培養一段時間後觀察。如果沒有細菌生長 就是操作的問題。
也可以在培養基中事先加入雙抗（硫酸鏈黴素和氨苄青黴素）。但雙抗有時會影響細胞的狀
態，所以在做轉染、檢測細胞某項指標前一定要撤去雙抗，以避免影響實驗結果。
1、孵箱應定期用三氧機消毒 或者 紫外光照射，並用酒精和新潔爾滅試擦孵箱同時孵箱內的水應是三蒸水
2、超凈台\取材\器材\培養液\培養瓶\操作等因素
3、超凈台的風機不能過大，風機到6-8格。否則也可能能致黴菌污染
4、無菌室經甲醛熏蒸消毒後，可用同等量的氨水噴灑中和，約幾小時即可進入操作。

❹ 污染是培養基質量不好引起的嗎

（1）培養基不是無菌產品,但有菌落數量控制.
（2）培養基在使用前通過高壓或過濾滅菌.
（3）防止污染應該注意以下事項：A.從污染的源頭開始 確認工作細胞庫是否被污染：用細菌、真菌及支原體無菌試驗來確認並排除.同時要對無菌試驗培養基的靈敏度進行驗證.確認毒種工作種子批是否被污染：用細菌、真菌及支原體無菌試驗來確認並排除.同時要對無菌試驗培養基的靈敏度進行驗證.確認所用培養基及其添加成分（如小牛血清、NaHCO3等）是否被污染：用細菌、真菌及支原體無菌試驗來確認並 排除.同時要對無菌試驗培養基的靈敏度進行驗證.實際生產中,可以從配製好的培養液中取少量加入營養瓊脂於恆溫培養箱內培養,48小時即可觀察有無污染.一些單位在使用血清時候往往不經過過濾除菌處理便直接加入到培養液中,可能帶來污染.其它：高壓滅菌設備、過濾除菌設備均應進行驗證,確保滅菌和除菌效果；前者應在投產前及其後的每6個月進行驗證,後者應在每次除菌前、後進行驗證工作（至 少應在除菌後進行一次）.另外,應將有毒區與無毒區嚴格分開,並有各自獨立的空氣凈化系統及孵室,有毒區對無毒區應保持相對負壓,防止病毒對培養細胞（尤其是細胞庫）的污染.B.從GMP管理、SOP操作方面加強管理力度 每二周（或每周）對無菌操作室及潔凈區域按GMP要求進行檢測 人員的GMP管理和無菌操作強化培訓 C.一些特殊情況 細菌的大小從0.1-700m,為防止細小細菌的污染,過濾除菌應盡量採用0.1m的濾膜或濾芯.大面積污染時,應對所有設施、用具及操作環境進行徹底消毒.

❺ 培養基受到了污染，如何判斷它是細菌污染還是真菌污染

細菌菌落較小，形狀表面或光滑黏稠，或粗糙乾燥，易挑起，多為白色；
真菌落較大、菌絲細長，菌落疏鬆，呈絨毛狀、蜘蛛網狀、棉絮狀，無固定大小，多有光澤，不易挑，有時還呈現紅色、褐色、綠色、黑色、黃色等不同的顏色（孢子的顏色）
看菌落一般大致可以看出，
要是還是看不出，就鏡檢。常見的真菌酵母黴菌，很容易看出。最常見的污染就是黴菌了。

❻ 培養基的污染可能來源有哪些方面

接種時空氣污染，培養液消毒時間不夠

❼ 如何判斷培養基是否污染

固體培養基可以37攝氏度培養24h觀察有無雜菌生長；液體培養基可以無菌操作取0.1ML塗布到無菌蛋白棟牛肉膏培養基上37攝氏度培養24h觀察有無雜菌生長.

❽ 污染是培養基質量不好引起的嗎

博凌科為生物科技-為你解答：1）培養基不是無菌產品，但有菌落數量控制。 （2）培養基在使用前通過高壓或過濾滅菌。 （3）防止污染應該注意以下事項： A.從污染的源頭開始 確認工作細胞庫是否被污染：用細菌、真菌及支原體無菌試驗來確認並排除。同時要對無菌試驗培養基的靈敏度進行驗證。 確認毒種工作種子批是否被污染：用細菌、真菌及支原體無菌試驗來確認並排除。同時要對無菌試驗培養基的靈敏度進行驗證。 確認所用培養基及其添加成分（如小牛血清、NaHCO3等）是否被污染：用細菌、真菌及支原體無菌試驗來確認並 排除。同時要對無菌試驗培養基的靈敏度進行驗證。實際生產中，可以從配製好的培養液中取少量加入營養瓊脂於恆溫培養箱內培養，48小時即可觀察有無污染。 一些單位在使用血清時候往往不經過過濾除菌處理便直接加入到培養液中，可能帶來污染。 其它：高壓滅菌設備、過濾除菌設備均應進行驗證，確保滅菌和除菌效果；前者應在投產前及其後的每6個月進行驗證，後者應在每次除菌前、後進行驗證工作（至 少應在除菌後進行一次）。 另外，應將有毒區與無毒區嚴格分開，並有各自獨立的空氣凈化系統及孵室，有毒區對無毒區應保持相對負壓，防止病毒對培養細胞（尤其是細胞庫）的污染。 B.從GMP管理、SOP操作方面加強管理力度 每二周（或每周）對無菌操作室及潔凈區域按GMP要求進行檢測 人員的GMP管理和無菌操作強化培訓 C.一些特殊情況 細菌的大小從0.1-700m，為防止細小細菌的污染，過濾除菌應盡量採用0.1m的濾膜或濾芯。 大面積污染時，應對所有設施、用具及操作環境進行徹底消毒。

❾ 菌種污染的原因有哪些

在三級菌種生產的全過程中，常會發生雜菌污染。因此，必須高度重內視，嚴格無菌操容作，注意每個操作環節，盡可能不受或少受雜菌污染，使菌種成品率提高。
（1）培養基污染組成培養基的各種原料，本身不同程度地混有雜菌和雜菌孢子。如果消毒滅菌不徹底，培養5天左右，在培養基表面和內部就會同時發生雜菌。（2）菌種本身污染由於母種、原種本身不純，污染上雜菌。當它們進行轉接時，會造成大批污染。而且雜菌由轉接種塊上開始蔓延。這樣的菌種堅決不能用。選擇菌種要十分小心，有一點懷疑就不可採用。（3）操作污染在確認母種或原種純度較高，而且在培養基已徹底滅菌的情況下，發現被轉接的培養基表面（包括種塊周圍）出現雜菌污染時，說明接種室（箱）、用具、菌種瓶表面及操作人員的手和工作服等消毒處理得不好，或者違反了接種操作規程。（4）環境污染由於培養室消毒不徹底，或者菌種瓶棉塞潮濕，或者瓶口洗得不幹凈，常常造成培養後的雜菌污染。這種污染現象是在菌絲體已經長滿斜面或菌種瓶後，在培養料表面出現雜菌，使接種後的菌種發霉，不能長耳。

❿ 懷疑培養基污染了 怎麼辦

可以將培養基裝幾毫升到15ml離心管，用封口膜封口，放培養箱24-48h觀察培養基狀態。