葯敏監督儀

1. 中山市疾病預防控制中心的介紹

中山市疾病預防控制中心設有9個科室，在冊工作人員148人，中心固定資回產原值3270萬元，擁有答氣質聯用儀、離子色譜儀、氣相色譜儀、高效液相色譜分析儀、全自動細菌鑒定及葯敏分析儀、水質流動注射分析儀、全自動定量熒光PCR系統等一大批先進的進口設備。同時我中心已通過中國實驗室國家認可、CMA計量認證和省衛生監督檢驗檢測機構認定，是市科技興醫「十五」規劃重點實驗室，是市唯一獲得省衛生廳認可，具備從事職業性健康檢查和職業病診斷資格的機構，現為中山大學公共衛生學院、廣東葯學院的教學基地。

2. 葯敏試驗的實驗步驟

普通營養瓊脂培養基：可去生化試劑店購買，做不同細菌的葯敏試驗可選擇不同的培養基，如做大腸桿菌的葯敏試驗可選擇普通營養瓊脂或麥糠凱培養基。做沙門氏菌可選擇血清培養基。
葯敏試紙：購買或自製（詳見實驗准備）
細菌：待做葯敏試驗的細菌
儀器：接種環、酒精燈、打孔器、牛津杯、移液器、滴頭 2.1葯敏片的准備：購買或自製
2.1.1制備方法：取新華1號定性濾紙，用打孔機打成6毫米直徑的圓形小紙片。取圓紙片50片放入清潔乾燥的青黴素空瓶中，瓶口以單層牛皮紙包紮。經15磅15-20分鍾高壓消毒後，放在37℃溫箱或烘箱中數天，使完全乾燥。
2.1.2抗菌葯紙片製作：在上述含有50片紙片的青黴素瓶內加入葯液0.25毫升，並翻動紙片，使各紙片充分浸透葯液，翻動紙片時不能將紙片搗爛。同時在瓶口上記錄葯物名稱，放37℃溫箱內過夜，乾燥後即密蓋，如有條件可真空乾燥。切勿受潮，置陰暗乾燥處存放，有效期3-6個月。
2.2葯液的制備（用於商品葯的試驗）：按商品葯的使用治療量的比例配製葯液；如商品葯百病消按其說明量治療量0.01%飲水，可按這個比例配製葯液，可取10毫克加入10毫升的水中混勻。此稀釋液即為用於做葯敏試驗的葯液。 3.1葯敏片法
3.1.1在「超凈台」中，用經（酒精燈）火焰滅菌的接種環挑取適量細菌培養物，以劃線方式將細菌塗布到平皿培養基上。具體方式；用滅菌接種環取適量細菌分別在平皿邊緣相對四點塗菌，以每點開始劃線塗菌至平皿的1/2。然後，找到第二點劃線至平皿的1/2，依次劃線，直至細菌均勻密布於平皿。（另：可挑取待試細菌於少量生理鹽水中製成細菌混懸液，用滅菌棉拭子將待檢細菌混懸液塗布於平皿培養基表面。要求塗布均勻緻密，直接懸液法要把菌液濃度用生理鹽水或PBS調到0.5個麥氏標准再塗布均勻。）
3.1.2將鑷子於酒精燈火焰滅菌後略停，取葯敏片貼到平皿培養基表面。為了使葯敏片與培養基緊密相貼，可用鑷子輕按幾下葯敏片。為了使能准確的觀察結果，要求葯敏片能有規律的分布於平皿培養基上；一般可在平皿中央貼一片，外周可等距離貼若乾片（外周一般可貼七片），每種葯敏片的名稱要記住。
3.1.3將平皿培養基置於37℃溫箱中培養24小時後，觀察效果。
3.2牛津杯法
3.2.1在「超凈台」中，用經（酒精燈）火焰滅菌的接種環挑取適量細菌培養物，以劃線方式將細菌塗布到平皿培養基上。具體方式；用滅菌接種環取適量細菌分別在平皿邊緣相對四點塗菌，以每點開始劃線塗菌至平皿的1/2。然後，找到第二點劃線至平皿的1/2，依次劃線，直至細菌均勻密布於平皿。（另：可挑取待試細菌於少量生理鹽水中製成細菌混懸液，用滅菌棉拭子將待檢細菌混懸液塗布於平皿培養基表面。要求塗布均勻緻密。）
3.2.2以無菌操作將滅菌的不銹鋼小管（內徑6nm、外徑8nm、高10nm的圓形小管，管的兩端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培養基上，輕輕加壓，使其與培養基接觸無空隙，並在小管處標記各種葯物名稱。每個平板可放4-6支小管。待分鍾後，分別向各小管中滴加一定數量的各種葯液，勿使其外溢。置37℃培養8-18小時，觀察結果。
3.2.3將平皿培養基置於37℃溫箱中培養24小時後，觀察效果。
3.3打孔法：
該法較簡單，成本低，易操作，比較適用於商品葯物的檢測。
3.3.1在「超凈台」中，用經（酒精燈）火焰滅菌的接種環挑取適量細菌培養物，以劃線方式將細菌塗布到平皿培養基上。具體方式；用滅菌接種環取適量細菌分別在平皿邊緣相對四點塗菌，以每點開始劃線塗菌至平皿的1/2。然後，找到第二點劃線至平皿的1/2，依次劃線，直至細菌均勻密布於平皿。（另：可挑取待試細菌於少量生理鹽水中製成細菌混懸液，用滅菌棉拭子將待檢細菌混懸液塗布於平皿培養基表面。要求塗布均勻緻密。）
3.3.2以無菌操作將滅菌的不銹鋼小管（外徑為4毫米、孔徑與孔距均為3毫米，管的兩端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培養基上打孔，將孔中的培養基用針頭挑出，並以火焰封底，使培養基能充分的與平皿融合（以防葯液滲漏，影響結果）。
3.3.3加樣：按不同葯液加樣，樣品加至滿而不溢為止。
3.3.4將平皿培養基置於37℃溫箱中培養24小時後，觀察效果。

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標本5-10ml，注入含106mmol/L枸櫞酸鈉抗凝劑的無菌容器中，抗凝劑與標本比例1：9。